هدف از اختراع موجود توليد موش مبتلا به ديابت نوع 2 در اثر رژيم غذايي AGEs و كم تحركي مي باشد. القاي موش ديابتي بوسيله كم تحركي و افزايش مصرف غذا حاوي AGEs (Advanced Glycation End products) انجام شده است. ميزان AGEs بصورت كاملا طبيعي و بصورت فرآوري شده افزايش مي يابد كه اين فرآيند كاملا شبيه غذاهاي انساني است و بصورت شيميايي به جيره هاي غذايي افزوده نشده است. همچنين، با توجه به اينكه القاي ديابت با كمك داروهاي شيميايي ناكارآمد است و بطور كامل سبب القاي ديابت نوع 2 نمي گردد و از سوي ديگر اختلالات ژنتيكي نيز شبيه به مدل انساني نمي باشد. نكته حائز اهميت اين است كه در اين اختراع دو عامل مهم در زندگي انسان ها يعني رژيم غذايي و فعاليت بدني كه نقش كليدي در چاقي و ديابت دارد در نظر گرفته شده است. در واقع اين اختراع شبيه سازي جامعه امروزي از لحاظ تغذيه و سبك زندگي مي باشد و نكته مهم و متمايز نسبت به ساير اختراعات ديگر مي باشد.

رگ‌زايي يك فرآيند زيستي مهم در بسياري از شرايط فيزيولوژيك و پاتولوژيك است. VEGFها خانواده‌اي از تنظيم كننده‌هاي كليدي در رگ‌زايي بوده كه مهم‌ترين و شناخته شده‌ترين عضو اين خانواده VEGF-A مي‌باشد. در حال حاضر VEGF ها به‌طور گسترده‌اي در جهان توسط تكنيك‌هاي مهندسي ژنتيك به‌صورت نوتركيب توليد مي¬شوند و در تحقيقات مختلف رگ‌زايي، سلول‌هاي بنيادي، پزشكي ترميمي و مهندسي كشت بافت مورد مصرف قرار مي¬گيرند. VEGF-A به صورت واريانت‌هاي مختلفي وجود داشته كه حاوي اگزون‌هاي متفاوت، ويژگي‌هاي برجسته متمايز و الگوهاي بياني اختصاصي مي‌باشند. در بين تمام ايزوفرم‌هاي VEGF-A، فاكتور جديد 111VEGF با ويژگي رگ‌زايي قوي و پايداري بسيار بالا از اهميت ويژه‌اي در تحقيقات بيولوژي مولكولي برخوردار بوده و به عنوان يك فاكتور درماني پيشنهاد مي‌شود. رگ‌زايي ناقص و ايسكمي يكي از مشكلات مهم در پزشكي و در بسياري از اختلالات شامل بيماري هاي قلبي – عروقي و جراحت‌ها مي‌باشد. در اين شرايط پاتولوژيك، محيط پروتئوليتيك و مخصوصاً سرين پروتئازهايي مانند پلاسمين منجر به تجزيه‌ي VEGF-A و رگ‌زايي ناقص مي‌شوند. ويژگي رگ‌زايي قوي در واريانت 111VEGF و مقاومت آن نسبت به فرآيند پروتئوليز، آن را به كانديد جالب و جذاب براي كاربردهاي درماني در بيماري‌هاي ايسكميك تبديل نموده است. هدف از پروژهي حاضر، سنتز و كلونينگ cDNAي فاكتور رشد 111VEGF به صورت نوتركيب همراه با افزودن توالي اينتروني (براي اولين بار در جهان) به منظور بالا بردن ميزان بيان و ترجمه‌ي اين ايزوفرم مي‌باشد. در اين راستا، طي واكنش‌هاي PCR مجزا قطعات كد كننده اگزون‌هاي 4-1 و اينترون 5-4 تكثير شده و با قرار دادن توالي كد كننده جايگاه شناسايي يكي از آنزيم‌هاي نوع IIs به نام Eco31I در پرايمرهاي مورد نظر، اين دو قطعه‌ي به يكديگر متصل شده و در وكتور pBud.CE4.1 كلون گرديدند. در ادامه، پلاسميد نوتركيب pBud-VEGF111 درون باكتري E.coli Top10 ترانسفورم شده و پس از تأييد فرآيند كلونينگ درون دو لاين سلولي CHO dhfr- و HEK 293 ترانسفكت گرديد. سپس، بيان ايزوفرم 111VEGF توسط تكنيك Real time PCR و در دو لاين سلولي مورد استفاده بررسي شد. در نهايت توليد پروتئين 111VEGF از طريق دو تست دات بلات و الايزا به طور كيفي مورد مطالعه قرار گرفت. در مجموع، با توجه به روند رو به رشد تحقيقات حيطه پزشكي و زيستي در كشور، نياز به نمونه داخلي فاكتورهاي نوتركيب بيش از پيش احساس مي‌گردد. به علاوه، با توجه به گسترش آمار ابتلا به بيماري‌هاي قلبي-عروقي در سراسر جهان و ايران، توليد داروها و فاكتورهاي رشد نوتركيب در راستاي درمان و تحقيقات مورد نياز براي اين بيماري از اهميت فوق العاده‌اي برخوردار است. عملي نمودن پروژه حاضر گامي نو در راستاي پاسخ به نياز كشور در بومي‌سازي توليد انواع فاكتورهاي رشد و داروهاي نوتركيب مورد نياز در تحقيقات و پژوهش‌هاي زيست پزشكي است.

زمينه فني : القاي چاقي در مدل حيواني مشكل فني، كاربرد يا كاربرد هاي اصلي اختراع: جهت القاي چاقي در مدل هاي حيواني از جمله \\\\\\"Balb/c، C57bl/6، Rat\\\\\\" و مدل هاي حيواني كه به رژيم غذايي پرچرب حساس هستند از اين فرمولاسيون خوراك دام استفاده مي شود. در اكثر مطالعات علوم پايه و رشته هاي پيراپزشكي جهت بررسي فاكتورهاي فيزيولوژيك و ژنتيكي در بافت هاي مختلف بدن از مدل هاي حيواني استفاده مي شود و از طرفي يكي از معضلات و مسائل جهان در كشور هاي توسعه يافته يا در حال توسعه، چاقي و بيماري هاي متابوليك مرتبط با آن است. لذا بررسي فاكتورهاي مختلف فيزيولوژيك و ژنتيك در بافت هاي مختلف بدن در مدل هاي چاقي حيواني ضروري به نظر مي رسد.