پروتئين فعال كننده پلاسمينوژن بافتي tPA يكي از انواع فعال كننده پلاسمينوژن مي باشد كه در رفع انسداد لخته اي كه از مهمترين علل بروز سكته قلبي و معزي است اهميت فراواني يافته است. اين پروتئين پيچيده داراي 527 امينو اسيد 17 باند دي سولفيد و چندين اليگو ساكاريد در سطح خود مي باشد كه همين مساله توليد آن را در ميزبان هاي پروكاروت مشكل كرده است. امروزه tPA نوتركيب با استفاده از سلولهاي تخمدان هامسترچيني CHO توليد مي شود. با اين حال، وجود مشكلاتي از قبيل گران بودن محيط كشت CHO و نيز ضرورت استفاده از سرم در محيط كشت كه احتمال بروز آلودگي را افزايش داده و خالص سازي پروتئين را مشكل مي كند، باعث شده است كه اخيرا مطالعه در جهت يافتن ميزبان هاي مناسب تر افزايش يابد. در سال خاي اخير انگل Leishmonia tarentolae از خانواده تريپاتوزوميده در توليد پروتئين هاي نوتركيب انساني اهميت زيادي يافته است كه از جمله علل آن مي توان به بيماريزا نبودن آم، سرعت بالاي رشد، امكان كشت در حجم بالا، محيط كشت ساده و عدم نياز به سرم و گليكوزيلاسيون مناسب پروتئين هاي حاصل و ... اشاره كرد. در پروژه حاضر تلاش بر آن بوده است تا tPA نوتركيب انساني با استفاده از Ltarentalae بيان گردد. بدين منظور دو كپي از ژن tPA در دو كانستراك بياني Ltarentalae كلون و پس از وارد كردن آنها به سلول انگل از طريق الكتروپوريشن، در ژنوم انگل اينتگره گرديدند. پس از جدا كردن كلون هاي ترانسفورم شده در محيط حاوي آنتي بيوتيك هاي مناسب بيان tPA نوتركيب در محيط كشت اين سلول ها بررسي شد. در نهايت با انجام تست Zymography بيان tPA نوتركيب در اين ميزبان به اثبات رسيد.

با توجه به نياز روزافزون در زمينه توليد پروتوينهاي نوتركيب براي مقاصد درماني و تشخيص لازم است كه از روشهاي مقرون به صرفه اي كه بازده توليد بيشتري دارند استفاده گردد. سيستمهاي متنوعي جهت بيان پروتوين نوتركيب در حال جاضر وجود دارد كه علي رقم تنوع آنها هيچيك از آنها به طور گسترده مورد استفاده قرار نمي گيرد. از آنجايي كه پروتوين اينترفرون گاما، نيز داراي كاربردهاي پزشكي زيادي از جمله درمان بيماريهاي نقص ايمني مادرزادي همچنين مبارزه با عفونتهاي درون سلولي مانند نيشمانيا مي باشد، توليد بيوتكنولوژيك آن از اهميت خاصي برخوردار است. از آنجايي كه يكي از روشهاي جديد در توليد پروتوين هاي نوتركيب استفاده از ارگانيسمهاي پوكاريوتي مي باشد، در اين مطالعه انگل ليشمانيا تا رنتولويي كه از مارمولك بدست آمده و غير بيماريزا مي باشد و همچنين توانايي تغييرات پس از ترجمه پروتوين را دارد، به عنوان سيستمي براي توليد پروتين اينترفرون گاماي نوتركيب استفاده شده است. در اين تحقيق DNA ژن اينترفرون گاما وارد جايگاه ژن 18S RRNA ژنوم ليشمانيا گرديد. و تائيد محل قرار گرفتن ژن اينترفون توسط روش PCR انجام شد. همچنين بيان پروتوين اينترفرون گاما در سلولهاي ليشمانيا توسط روشهاي SDS PAGE وسترن بلاتينگ مورد مطالعه قرار گرفت. نتايج اين آزمايشها، بيان پروتوين اينترفرون گاما در اين ارگانيسم يوكاريوتي را تائيد كرد.