بسمه تعالي "خلاصه اختراع" عنوان اختراع: فارسي: ابداع تكنيك دات بلات معكوس تغيير يافته با دنباله بسيار بلند (تكنيك SMRDB ) انگليسي: Developed novel method: Super tailed Modified Reverse Dot Blot (SMRDB technique) اين اختراع در حيطه بيوتكنولوژي و پزشكي بوده و مرتبط با تشخيص و درمان سرطان مي باشد كه به طور ويژه براي بررسي جهش هايي است كه تشخيصي و/يا پيش آگهي مي باشد. بيماران مبتلا به سرطان كلوركتال براي درمان از آنتي بادي هاي مونوكلونال به نام Panitumumab و Cetuximab استفاده مي نمايند، در صورتي كه بيمار در ژن KRAS خود جهش داشته باشد به درمان با اين دارو ها جواب نمي دهد. بنابراين بررسي جهش در ژن KRAS بيماران مبتلا به سرطان كلوركتال و غربالگري آن ها، از نظر پزشكي بسيار حائز اهميت مي باشد و كمك زيادي به درمان اين بيماران مي نمايد. براي بررسي جهش در ژن KRAS بيماران مبتلا به سرطان هاي مختلف از جمله سرطان كلوركتال، بايد از روشي با حساسيت بالا استفاده شود تا بتوان جهش در تنها يك نوكلئوتيد از كدون هاي مرتبط اين ژن را نيز شناسايي نمود. تكنيك هاي مختلفي با ميزان حساسيت متفاوت وجود دارد كه در بين اين تكنيك ها، تكنيك دات بلات معكوس، حساس ترين آن ها مي باشد. در اين پژوهش، نوآوري در روش دات بلات معكوس (Reverse Dot Blot) انجام شده است تا بتوان با حساسيت بسيار بالا به بررسي جهش هاي ژن KRAS در بيماران بپردازيم. اين نوآوري، ايجاد تغييراتي در پروب هاي اختصاصي، زمان بندي و غلظت هاي نمكي در بافر هاي هيبريداسيون مي باشد. با توجه به ايجاد جهش تنها در يك نوكلئوتيد در كدون ژن KRAS، طراحي پروب مناسب و چسباندن آن به غشا كار ساده اي نيست. بنابراين در اين پژوهش براي مشخص شدن جهش در ژن KRAS با استفاده از تكنيك دات بلات معكوس، به ابداع روش نوين دات بلات معكوس تغيير يافته با دنباله بسيار بلند (تكنيك SMRDB) پرداختيم. مراحل تيمار كردن پروب هاي اختصاصي و غشا، چسباندن يا كد گذاري اين پروب ها بر روي غشا و مراحل هيبريداسيون با بافرهاي مناسب از نظر غلظت و دماي بهينه، مراحل كليدي در طراحي اين تكنيك مي باشد. اين تكنيك تاكنون براي بررسي جهش ها در ژن KRAS در ايران طراحي نشده است و در حال حاضر در دنيا تنها يك شركت خارجي، كيت تشخيصي براي بررسي موتاسيون هاي ژن KRAS توليد نموده كه ايران و ديگر كشور هاي دنيا بعنوان مصرف كننده ي آن مي باشند. مشكل اصلي در بهينه كردن اين تكنيك، تيمار مناسب غشا، چسباندن پروب به آن، تهيه بافرهاي مناسب هيبريداسيون با غلظت نمكي خاص، تهيه محلول بلاكينگ و تنظيم دما و زمان بندي هاي هر مرحله مي باشد كه براي حل مشكل فني در اين نوآوري با ابداعdouble system modification بر روي پروب ها توانستيم با كيفيت بسيار مناسب پروب ها را به غشا بچسبانيم و نتيجه بسيار مطلوبي در تشخيص بدست آوريم.

خلاصه اختراع: محلول فنلي استخراج RNA از ادرار جهت حصول RNA خالص بدون آلودگي با DNA به منظور استفاده مستقيم در RT PCR وRealtime PCR طراحي شده است . از آنجا كه ميزان سلول هاي ادرار پائين است و RNAكل موجود در ادرار ميزان بالايي نداردبنابراين ابداع روشي كه RNA ادرار را با كيفيت مطلوب وبازدهي بالا RNAاستخراج كند حائز اهميت است. در اين روش سعي برآن شده با اضافه كردن يك نمك جديد به عنوان نمك كائوتروپيك وتغيير غلظت ( 45% تا 70%)و PH( 2.8 تا 3.2) فنل اسيدي RNA, قابل ملاحظه خالص در فاز آبي جداسازي گردد. اين محلول حاوي نمك هاي كائوتروپيك مشتق از گوانيدين به منظور مهار ريبونوكئاز و نمك هاي نمك هاي آلي يا غير آلي به عنوان شلاتورميباشد.يك پلي الكل حلال فنل نيز به محلول اضافه گرديده است. به منظور حفظ PH در محدوده مورد نظر از يك اسيد وبافر متناسب آن استفاده شده است. RNA خالصي كه با اين روش حاصل ميشود جهت بررسي بيان ژن در تحقيقات قابل استفاده خواهد بود.