پمپ‏هاي افلاكس يكي از دلايل مهم مقاومت سويه‏هاي باكتريايي اسينتوباكترباماني به آنتي‏بيوتيك به شمار مي‏آيند. هدف از اين مطالعه، سنتز سبز نانوذرات نقره با استفاده از عصاره اتانولي برگ گياه تلخه و بررسي اثرات آن بر بيان ژن‏هاي adeA و adeC پمپ افلاكسي در جدايه‏هاي باليني مقاوم به دارو اسينتوباكترباماني مي‏باشد. در اين مطالعه تجربي، ابتدا نانوذرات نقره با استفاده از عصاره اتانولي برگ گياه تلخه سنتز گرديد. در ادامه ساختمان، اندازه و اجزاي نانوذرات توليد شده توسط روش‏هاي اسپكتروفتومتري (UV-Vis)، تفرق اشعه ايكس (XRD)، ميكروسكوپ الكتروني نگاره (SEM) و گذاره (TEM)، Psd و FTIR تاييد و بررسي شدند. به دنبال آن وجود پمپ افلاكس adeAC در 21 ايزوله باليني مقاوم به آنتي‏بيوتيك اسينتوباكتربامانيتوسط روش كارت ويل و PCR ارزيابي شد. همچنين اثرات ضدپمپ افلاكسي نانوذرات نقره با روش حداقل غلظت بازدارنده (MIC) مورد بررسي قرار گرفت. در نهايت اثر نانوذرات نقره سنتز شده بر ميزان بيان ژن‏هاي adeA وadeC توسط تكنيك Real-Time PCR بررسي گرديد. به منظور آناليز آماري داده‏ها از نرم افزار Graphpad prism5 استفاده شد. در اين نرم افزار مقايسه نسبي ميزان بيان اين ژن‏ها در سويه كنترل در مقايسه با سويه تيمار شده بر اساس 2^(-∆CT) كنترل و تيمار شده اندازه‏گيري شد و معنادار بودن داده‏ها نيز براساس آزمون T-test (P≤0.05) ارزيابي گرديد. نتايج اين تحقيق بدين صورت بود كه نانوذرات نقره سنتز شده توسط جذب بيشينه در طول موج 420 نانومتر در روش UV-Vis مورد تاييد قرار گرفتند. تصاوير ميكروسكوپ الكتروني SEM و TEM نشان داد كه نانوذرات نقره كروي شكل هستند و نتايج آناليزPsd نشان داد كه نانوذرات نقره داراي ميانگين اندازه 89/38 نانومتر مي‏باشند. هم چنين نتايج XRD ساختار cubic نانوذره سنتز شده را تاييد مي‏كند.همچنين نتايج FTIR تفاوت ساختار ملكولي عصاره اتانولي برگ گياه تلخه با نانوذرات را به خوبي نشان مي‏دهد. نتايج روش كارت ويل و PCR نشان داد كه از ميان 21 ايزوله اسينتوباكتر‏باماني، 12 سويه داراي پمپ افلاكس فعال هستند. هم چنين، ميزان MIC اتيديوم برومايد در سويه‏هاي مقاوم به همراه نانوذرات نقره كاهش يافت. نتايج تكنيك Real-Time PCR كاهش بيان هر دو ژن adeA و adeCرا نشان داد. بنابراين با توجه به اثرات ضدپمپ افلاكسي نانوذرات نقره سنتز شده در سويه هاي اسينتوباكترباماني به نظر مي‏رسد كه اين نانوذره پتانسيل استفاده در صنايع دارويي را دارد، اما مطالعات بيشتر در اين زمينه مورد نياز مي‏باشد.

خلاصه: ‏استرپتوكيناز پروتئين ترشحي است كه توسط گروههاي A،C‏ وG استرپتوكوك هاي بتاهموليتيك توليد شده و نوع نوتركيب آن سالهاست به عنوان داروي ترومبوليتيك در درمان اختلالات قلبي - عروقي بكار برده مي شود. اكثر مطالعات تاكنون بر روي ژن skc ‏استخراج شده از سويه GRPUP C STREPTOCOCCI ATCC 9542 ‏انجام شده است. در تحقيق حاضر از بين سويه هايي گروه c ‏و G ‏جمع آوري شده از ايران، بر اساس ميزان فعاليت استرپتوكيناز توليدي در تست كازئوليز و مقايسه آن با سويه استاندارد 9542 ATCC ‏، سويه اي متعلق به گروه G انتخاب شد و ژن استخراج شده پس از تعيين توالي، كلون و بيان گرديد و مشخص شد اين سويه هاراي جهش هاي طبيعي در موقعيت هاي بسيار مهم دخيل در فعاليت آنزيمي مي باشد. از جمله موقعيت ۴٧ ‏و ٢۵٣ ‏كه هر دو در شناسايي و تشكيل كمپلكس با پلاسمينوژن انساني نقش دارند و تغيير اسيد آمينه ١٣٨ ‏كه در مطالعات قبلي به عنوان آنتي ژن شناخته شده است. به نظر مي رسد ژن اين سويه خاص قابليت هاي مناسبي در جهت توليد استرپتوكيناز نوتركيب با خصوصيات بهتري نسبت به ژن قبلي دارا مي باشد.