‏بيماري جاروك ليمو ترش يكي از مخربترين بيماريهاي ليموترش در مناطق گرم جنوبي كشور مي باشد كه هزاران درخت را ساليانه در اين مناطق نابود مي كند‏. با توجه به عدم دسترسي به روش كنترلي مناسب بر عليه اين بيماري و همچنين با توجه به اينكه اين بيماري در حال حاضر محدود به نواحي جنوبي كشور بوده، امحاء كانون هاي آلودگي و جلوگيري از حمل و نقل مواد گياهي آلوده از جمله مهمترين اقدامات در دست اجراي وزارت كشاورزي و ساير نهاد هاي ذيربط در اين مسئله ميباشد. بنابراين دسترسي به يك روش تشخيص با دقت و حساسيت بالا كه قابليت انجام در مناطق دورافتاده ‏و با حد اقل امكانات را دارا باشد از جمله مهمترين نياز هاي اوليه در اين خصوص ميباشد. در اينجا كيت سرولوژي DAS-ELISA ‏جهت تشخيص دقيق و سريع نمونه هاي آلوده توليد گرديده است كه قابليت استفاده در آزمايشگاه هايي با حداقل ‏امكانات را دارا ميباشد. در اين تحقيق پروتئين Imiliunodominant ‏( membrane protein (IMP ‏ موجود در سطح غشا فيتوپلاسما به عنوان هدف جهت شناسائي اين بيماري انتخاب گرديده است. با استفاده از منابع اطلاعاتي ژنتيكي در ابتدا پرايمر هاي اختصاصي ژن IMP ‏ طراحي گرديد و جداسازي ژن مربوطه از گياهان آلوده صورت پذيرفته و جهت توليد انبوه بصورت نوتركيب، در ناقل بياني باكترياثي p.ET28 ‏ همسانه سازي گرديد. بيان پروتئين نوتركيب IMP ‏ در ميزان زياد در استرين BL21-de3 ‏ باكتري E. coli ‏ انجام گرديد و خالص سازي پروتئين مربوطه در شرايط طبيعي با روش كروماتوگرافي تمايلي در ستون هاي حاوي رزين (Ni-NTA ‏) انجام شد. بيان موفق و مراحل خالص سازي بوسيله SDS-PAGE ‏ و سپس آناليز وسترن بلات تاييد گرديد. پروتئين نوتركيب خالص IMP ‏براي انجام ايمني زائي در خرگوش استفاده گرديد. تزريق ها بصورت هفتگي ادامه يافته و پس از هر تزريق عيار آنتي بادي هاي اختصاصي تعيين گرديد. هنگامي كه عيار آنتي بادي هاي اختصاصي به حد مطلوب رسيد، خونگيري از خرگوش انجام گرفته و سپس سرم خون جداسازي گرديد. بر اساس آزمون هاي تعيين تيتر، آخرين تيتر آنتي ‏بادي كه با آنتي ژن مربوطه واكنش اختصاصي ايجاد نمود در حد 6۵۵٣6 ‏تعيين گرديد. ازمون تكميلي وسترن با پلاتينگ جهت تاييد اختصاصيت آنتي بادي هاي حاصله صورت گرفت كه نتاج حاصله حاكي از انجام واكنش اختصاصي با نمونه هاي آلوده بود. جهت ساخت كيت سرولوژيكي تشخيص DAS-ELISA ‏ ابتدا آنتي بادي هاي موجود در سرم خون با استفاده از از ستون پروتئين A ‏ خالص سازي گرديد و پس از تاييد خلوص و تعيين غلغلت جه اتصال به آنزيم آلكالين فسفاتاز مورد استفاده قرار گرفت و براي استفاده در سيستم تشخيص DAS-ELISA ‏ مورد استفاده قرار گرفت. نتايج حاصله از اين آزمايش قابليت كيت سوولوژيكي موبوطه را جهت شناسائي نمونه هاي آلوده گياهي تاييد نمود.