اين اختراع تحت عنوان " ساخت آنزيم 3- فيتاز قارچي مقاوم به اسيد (phyA) بصورت نوتركيب در مخمر Pichia pastoris" مي باشد . توليد آنزيم توسط قارچها نظير آسپرژيلوس بدليل عدم ثابت بودن فرمولاسيون محيط كشت كيفيت ثابتي ندارد. و به دليل غير ترشحي بودن آنزيم، نياز به مراحل متعدد و پرهزينه تخليص دارد. به دليل احتمال آلرژن بودن براي استفاده در صنايع غذايي محدوديت دارد. اين اختراع مشكلات فوق را برطرف ساخته است. بطور دقيق تر در اين اختراع تكنولوژي DNA نوتركيب براي توليد اين آنزيم استفاده شده است كه از طريق ساخت يك زنجيره پلي نوكلئوتيدي DNA جديد با كدون هاي اپتي مايز شده، توليد آنزيم صورت مي گيرد. اين اختراع فرايند ساخت وكتوري كه اين زنجيره پلي نوكلئوتيدي DNA را به ژنوم ميزبان مخمر Pichia pastoris منتقل مي كند توصيف مي كند و ميزبان مخمر نوتركيب تحت شرايط قابل كنترل آنزيم 3- فيتاز قارچي نوتركيب را توليد و به محيط كشت ترشح مي كند. آنزيم توليد شده در اين اختراع داراي فعاليت بيولوژيكي آزادسازي فسفر معدني از منابع فيتيك اسيد را دارا مي ياشد كه جهت استفاده به عنوان مكمل غذايي در جانداران تك معده اي از جمله دام و طيور كاربرد دارد.

خلاصه اختراع اين اختراع تحت عنوان "توليد گلوكز اكسيداز نوتركيب بر اساس پلي نوكلئوتيد سنتتيك بهينه شده" مي باشد. توليد آنزيم توسط قارچها نظير آسپرژيلوس بدليل عدم ثابت بودن فرمولاسيون محيط كشت كيفيت ثابتي ندارد. و به دليل غير ترشحي بودن آنزيم، نياز به مراحل متعدد و پرهزينه تخليص دارد. كه به دليل احتمال آلرژن بودن براي استفاده در صنايع غذايي و بهداشتي محدوديت دارد. اين اختراع مشكلات فوق را برطرف ساخته است. بطور دقيق تر در اين اختراع تكنولوژي DNA نوتركيب براي توليد اين آنزيم استفاده شده است كه از طريق ساخت يك زنجيره پلي نوكلئوتيدي DNA جديد با كدون هاي اپتي مايز شده، توليد آنزيم صورت مي گيرد. اين اختراع فرايند ساخت وكتوري كه اين زنجيره پلي نوكلئوتيدي DNA را به ژنوم ميزبان مخمر Pichia pastoris منتقل مي كند توصيف مي كند و ميزبان مخمر نوتركيب تحت شرايط قابل كنترل آنزيم گلوكز اكسيداز نوتركيب را توليد و به محيط كشت ترشح مي كند. آنزيم توليد شده در اين اختراع داراي فعاليت بيولوژيكي تجزيه گلوكز مي ياشد كه جهت حذف گلوكز در صنايع غذايي و بهداشتي كاربرد دارد

اين اختراع در زمينه ساخت زنجيره آلفا نوتركيب هورمون هاي گليكوپروتئيني هيپوفيز انساني در سيستم يوكاربوتيك مخمر pichia pastoris مي باشد. گرچه اين پروتئين را مي توان در سلول هاي لاين پستانداران توليد و يا تخليص از بافتها ومايعات بدن انسان نيز به دست آورد اما هر دو روش پيچيده تر و پر هزينه تر بوده و احتمال آلودگي با ويروس با پرايون ها و احتمال وجود مقادير جزئي از ساير هورمون ها وجود دارد اين فرايند كه به مراتب ساده تر و كم هزينه تر و فاقد خطر آلودگي است فاقد مشكلات فوق مي باشد. اساس كار ما ساخت cDNA اين ژن و تشكيل يك سازه ژني به نام pPIC9-F2-351a شامل يك سيگنال سكانس مناسب براي مخمر به جاي سيگنال سكانس طبيعي ژن و تحت كنترل پروموتر القاء شونده توسط متانول بوده است. اين ژن از طريق اين سازه ژني به محل ژن AOX1 ژنوم مخمر Pichia pastoris منتقل شده است. ما مخمر نوتركيبي از pichia pastoris به دست آورده ايم كه واجد ژن آلفا نوتركيب هورمون هاي گليكوپروتئيني هيپوفيز انساني مي باشد. اين ژن مي تواند در ساخت هورمون هاي گليكوپروتئيني هيپوفيز انساني به صورت نوتركيب استفاده شود. ما همچنين زنجيره آلفا هورمون هاي گليكوپروتئيني هيپوفيز انساني را به صورت نوتركيب (pichie-drived rhFSHa) از طريق مخمر توليد كرده ايم كه اين فراورده از نظر ساختار فضايي، حفظ اپي توپ ها و ايمنواكتيويتي مشابه با پروتئين طبيعي انسان مي باشد. فرايند توليد اين پروتئين با اضافه كردن متانول به محيط كشت كنترل مي شود. اين فراورده مي تواند در داروسازي جهت ساخت هورمون FSH نوتركيب بكار رود كه از داروهاي اساسي در درمان ناباروري مي باشد. اين فراورده همچنين در ساخت كيت هاي تشخيصي براي اندازه گيري ميزان زنجيره آلفا نوتركيب هورمون هاي گليكوپروتئيني هيپوفيز انساني، توليد آنتي بادي هاي پلي كلونال و يا منوكلونال عليه اين زير واحد و در هيستوشيمي به كار رود.

اين اختراع در زمينه ساخت هورمون FSH انساني نوتركيب در سيستم يوكاريوتيك مخمر Pichia postoris مي باشد. گر چه اين پروتئين را مي توان در سلول هاي لاين پستانداران توليد و يا تخليص از بافتها و مايعات بدن انسان به دست آورد اما هر دو روش پيچيده و پر هزينه بوده و احتمال آلودگي با ويروس با پرايون ها و احتمال وجود مقادير جزيي از ساير هورمون ها وجود دارد اين فرايند كه به مراتب ساده تر و كم هزينه تر و فاقد خطر آلودگي است فاقد مشكلات فوق مي باشد. اساس كار ما ساخت سازه ژني واجد هر دو ژن آلفا و بتاي FSH انساني pPIC9-F2-336B-F2.351a بود با انتقال ژن هاي هورمون انساني از طريق اين سازه ژني به جاي ژن AOX1 در ژنوم مخمر ما مخمر نوتركيبي از Pichia pastoris به دست آورده ايم كه واجد ژن هاي توليد كننده هورمون FSH انساني بوده و قادر به توليد و ترشح اين هورمون انساني مي باشد. ما همچنين هورمون انساني FSH نوتركيب را از طريق مخمر (Pichia -drived rhFSH) توليد كرده ايم هورمون ساخته شده كامل بوده و مانند هورمون طبيعي انسان به صورت هترودايمر مي باشد. از نظر ساختار فضايي، حفظ اپي توپ ها و ايمنواكتيويتي هر دو زير واحد آلفا وب تا مشابه با هورمون طبيعي انسان مي باشد. فرايند توليد اين هورمون در توليد فراورده نهايي با اضافه كردن متانول به محيط كشت كنترل مي شود. اين فراورده مي تواند در داروسازي جهت ساخت هورمون FSH نوتركيب بكار رود كه از داروهاي اساسي در درمان ناباروري ميباشد. اين فراورده همچنين در ساخت كيت هاي تشخيصي براي اندازه گيري هورمون FSH انسان توليد آنتي بادي هاي پلي كلونال و يا منوكلونال عليه هورمون انساني و هيستوشيمي به كار مي رود.

ختراع حاضر، فرآيند بهينه شده ي توليد پپتيد ضدميكروبي تيلاپيا پسيدين 4 در مخمر پيكياپاستوريس مي باشد. تيلاپيا پسيدين 4 يك آنتي ميكروبيال پپتيد كاتيونيك است كه بصورت طبيعي توسط مست سل هاي Nile Tilapia, (Oreochromis niloticus) توليد مي شود. اين پپتيد با داشتن 25 آمينواسيد (FIHHIIGGLFSAGKAIHRLIRRRRR) داراي ساختار آلفاهيليكال است. بررسي ضدباكتريايي تيلاپيا پسيدين 4 برروي تعدادي از باكتري هاي گرم مثبت و گرم منفي نشان مي دهد كه اين آنتي ميكروبيال پپتيد داراي اثرات ضدميكروبي وسيع الطيف و قابل رقابت با آنتي بيوتيك ها است. در اين فرآيند ابتدا توالي سازنده ي تيلاپيا پسيدين 4 از منابع استخراج و بعد از بهينه سازي در وكتور pPIC9 كلون شده و سپس با كمك الكتروپوريشن در ژنوم پيكيا پاستوريس اينتگره گرديد. بهترين شرايط بياني مخمردر محيط حداقلي و فاقد پروتئين BMM ، بهترين غلظت متانول ، بهترين شرايط pH و زمان بررسي و مشخص گرديد. سپس به منظور تائيد عملكرد ضدميكروبي، تيلاپيا پسيدين 4 توليد شده در اين سيستم بر روي 12 باكتري گرم منفي و 5 باكتري گرم مثبت بررسي شد. توليد تيلاپيا پسيدين 4 به اين روش هزينه ي بسيار پاييني داشته و راه را براي مطالعات آينده و همچنين كاربردهاي درماني آن هموار مي كند.

ختراع حاضر، فرآيند بهينه شده ي توليد پپتيد ضدميكروبي پكسيگانان( Pexiganan )در مخمر پيكياپاستوريس مي باشد. پكسيگانان يك آنتي ميكروبيال پپتيد كاتيونيك با 22 آمينواسيد (GIGKFLKKAKKFGKAFVKILKK) مي باشد. اين پپتيد يك آنالوگ پايدارتر و قوي تر آنتي ميكروبيال پپتيد maganin 2 است كه بصورت طبيعي توسط گونه اي از قورباغه هاي آفريقايي توليد مي شود. پكسيگانان بر روي طيف گسترده اي از باكتري هاي گرم مثبت و گرم منفي اثر كشندگي دارد از همين رو تاكنون تلاشهاي زيادي براي كابردي كردن آن به عنوان يك داروي موضعي در درمان زخم معده، زخم پاي ديابتي و زخم گازگرفتگي انجام شده است. توليد ارزان قيمت اين پپتيد مي تواند راه را براي تحقيقات بيشتر و همچنين تجاري سازي اين محصولات هموار سازد. پكسيگانان توليد شده در اين فرآيند، علاوه بر به صرفه بودن، از لحاظ فعاليت ضدميكروبي كاملا مشابه با پكسيگانان سنتز شده به روش شيميايي عمل نمود.

اين اختراع در زمينه ساخت زنجيره بتاي هورمون محركه فوليكولي انساني بصورت نو تركيب در مخمر pichia pastoris ميباشد. اساس كار ما جداسازي ژن بتا از ژنوم انسان و تشكيل يك سازه ژني به نام pPIC9-F2-336β شامل يك سيگنال سكانس مناسب براي مخمر به جاي سيگنال سكانس طبيعي ژن و تحت كنترل پرومتر القاء شونده توسط متانول بوده است. ژن بتا از طريق اين سازه ژني به ژنوم مخمر Pichia oastorisمنتقل شده است.ما مخمر نوتركيبي از Pichia oastoris به دست آورده ايم كه واجد ژن بتا هورمون FSHانساني ميباشد. ما همچنين زنجيره بتا هورمون FSH انساني را از طريق مخمر(Pichia-drived rhFSHb) توليد كرده ايم.فرايند توليد فراورده نهايي با اضافه كردن متانول به محيط كشت كنترل ميشود.مخمر نو تركيب قادر است زنجيره بتا را توليد و ترشح نمايد.فراورده نهايي از نظر ساختار فضايي،حفظ اپي توپها و ايمنواكتيويتي مشابه با پروتئين طبيعي انسان ميباشد.اين فراورده در علوم پايه پزشكي و فيزيولوژي كاربرد داشته و براي توليد آنتي بادي هاي پلي كلونال و يا منوكلونال عليه زنجيره بتا هورمون انساني ساخت كيت هاي تشخيصي و هيستوشيمي به كار ميرود.