لیست اختراعات مهرداد موسي زاده مقدم
انتقال DNA خارجي با راندمان بالا به داخل سلول هاي باكتريايي ميزبان يكي از مهمترين مراحل در زيست فناوري ميكروبي مي باشد. براي اين منظور چند روش مرسوم مي باشد كه در بين آن ها روش كلسيم كلرايد سرد از جمله مهمترين و ارزان ترين روش هاي انتقال DNA به درون سلول هاي باكتريايي است كه براي باكتري هاي گرم منفي مانند E.coli بسيار كاربرد دارد. به طور معمول راندمان انتقال DNA در اين روش 105 – 107 كلوني براي يك ميكروگرم از DNA خارجي مي باشد. همچنين برخي از باكتري هاي گرم مثبت مانند B.subtilis كه در زيست فناوري ميكروبي كاربرد دارد مي توانند DNA را از طريق يك فرايند طبيعي جذب نمايند اما ميزان راندمان آن نيز بسيار پايين مي باشد. لذا با توجه به اهميت اين فرايند تلاش هاي بسياري به منظور بهينه سازي روش هاي دستي مرسوم كه در بسياري از آزمايشگاه ها كاربردي و ارزان مي باشند صورت پذيرفته است. در روش ابداعي ارايه شده ادعا مي شود كه با استفاده از يك پپتيد كاتيونيك تراوا كننده غشاء (Cell Permeable Peptide) به عنوان يك عامل نوين و مؤثر مي توان بر پايه روش كلريد كلسيم DNA خارجي را با نرخ بالايي به باكتري گرم منفي و گرم مثبت انتقال داد. در اين روش به عنوان مدل، پلاسميدهاي pET-28a( ) و pGEX4T-1 به طور جداگانه به درون باكتري E.coli و همچنين پلاسميد pWB980 به درون باكتري B.subtilis در حضور چهار غلظت از پپتيد ( 1 ،2 ،3 و 6 ميكروگرم در ميلي ليتر) منتقل گرديدند. در حضور غلظت 1 ميكروگرم در ميلي ليتر پپتيد (بالاترين راندمان انتقال بدست آمده) ، انتقال پلاسميد pET-28a( ) و pGEX4T-1 به درون باكتري E.coli به ترتيب 7/4 و 6/4 برابر روش استاندارد كلريد كلسيم مي باشد. همچنين ورود پلاسميد pWB980 به درون باكتري B.subtilisبه طور مؤثري در حضور غلظت 2 ميكروگرم در ميلي ليتر پپتيد افزايش يافت كه اين مقدار 4/6 برابر بيشتر از كنترل مي باشد.
در اين كيت به منظور استخراج DNA ژنومي باكتري هاي گرم منفي و مثبت از پودرهاي رخشويي استفاده شده است. از مزاياي آن كم هزينه بودن، سريع و با كمترين اثرات مخرب محيطي و فردي مي باشد زيرا در اين كيت برخلاف روشهاي دستي مرسوم در بسياري از آزمايشگاه هاي تحقيقاتي ديگر نيازي به استفاده از تركيبات شيميايي فنل و كلروفرم نمي باشد. از طرفي در مقايسه با بسياري از كيت هاي مشابه خارجي كه در آن ها بعضا از تركيبات شيميايي با هزينه بالاتر استفاده شده است، به سبب توليد اين پودرها به طور فراگير و با هزينه هاي بسيار پايين توسط شركت هاي داخلي هزينه توليد آن بسيار پايين مي باشد زيرا تركيباتي كه در اين كيت استفاده ميگردد تشكيل يافته از پودر رخشويي، استات سديم و اتانول مي باشد كه تركيباتي بسيار معمولي، قابل دسترس و با هزينه بسيار پايين مي باشند.
امروزه از داروهاي پپتيدي براي درمان سرطان استفاده ميشود. از مزاياي اين داروها نسبت به داروهاي شيمي درماني تجمع كمتر در اعضاي بدن(مثل كليه و كبد) و درنتيجه سميت كمتر و همچنين توانايي نفوذ به غشاي سلول و انتخاب پذيري بالاي آنها است. از معايب اين داروها ناپايداري و نيمه عمر كم آنها در محيط درون تني است. يكي از راههاي افزايش پايداري و طولاني تر شدن چرخش دارو در خون، بارگذاري اين داروها در يك حامل پليمري در ابعاد نانو است. اختراع حاضر نخستين بارگذاري پپتيد ضد سرطاني CM11 در نانو حامل است. نانوحامل از پليمر كيتوسان تهيه شده است كه با هيالورونيك اسيد پوشيده شده و در حوزه دارورساني هدفمند كاربرد دارد. پوششدار كردن نانوذرات توسط هيالورونيك اسيد باعث دارورساني هدفمند به بافت تومور شده و باعث مرگ و مير بيشتر سلولهاي سرطاني ميشود. تمايل هيالورونيك اسيد به اتصال با گيرندههاي CD44 در سطح سلولهاي سرطاني باعث جذب بيشتر نانوذرات ميشود. در اين روش ابتدا داروي پپتيدي در نانوذرات كيتوسان بارگذاري شده و ميزان بارگذاري بيشينه و اندازه ذرات كمينه شدند. سپس اين نانوذرات توسط هيالورونيك اسيد پوشيده شدند. نانوذرات تهيه شده در حالت بهينه 190نانومتر قطر داشته و بر روي سل لاينهاي سرطاني A549، SH-SY5Y و PANC-1 آزمايش شدند.
آسيب اعصاب محيطي، به خصوص جراحات شديد كه منجر به قطع كامل تنه ي عصبي و ايجاد فاصله بين دو انتهاي عصب ميگردد، اغلب با بازسازي ضعيف و حتي منفي عصب رو به رو ميشود و چنانچه دخالت موثري صورت نگيرد ممكن است منجر به نقص عضو گردد. از روشهاي نوين ترميم جراحت عصبي، استفاده از طب بازساختي است. اين روش شامل استفاده از مهندسي بافت وتكنولوژي سلولهاي بنيادي ميباشد. اين محصول از تكنولوژي مهندسي بافت در سطح بسيار پيشرفته اي برخوردار است و نتايج خيره كننده اي را حاصل كرده است. كارايي اين محصول در مطالعات آزمايشگاهي تاييد شده است. همچنين در مطالعه ي باليني بر روي مدل حيواني رت نيز كارايي آن اثبات شده است. تكنيك بكار رفته در ساخت اين محصول امنيت استفاده از آن را تضمين مي كند. اين محصول از طريق دو جراحي كوچك، يكي براي تهيه سلول تمايزي، و ديگري براي كاشت داربست مورد استفاده قرار ميگيرد. براي تاثير هر چه بيشتر سلولهاي بنيادي در بازسازي بافت آسيب ديده بهتر است كه اين سلولها از قبل به سلولهاي تخصصي بافت هدف تمايز داده شوند. از جمله سلولهاي تخصصي در سيستم اعصاب محيطي سلولهاي شوآن اند كه سلولهاي حمايتي اصلي در ترميم بافت عصبي و تشكيل دهندهي ميلين سيستم اعصاب محيطي هستند.از نوين ترين شيوه هاي تمايز ايمپرينتينگ است كه به دليل شيميايي نبودن در تمايز سلولي، راهگشاي استفاده گسترده انساني است. در اين اختراع، ايمپرينت سلول شوآن با استفاده از پلي دي متيل سيلوكسان، از سلولهاي شوآن جدا شده از عصب سياتيك تهيه ميشود. سپس سلولهاي بنيادي مزانشيمي مشتق از چربي در پاساژ 4 با استفاده از روش ايمپرينتينگ در طي مدت 18 روز به سلول شوآن تمايز داده ميشوند. پس از تاييد تمايز، براي حمل و استفاده از اين سلولها بر روي داربست نانوالياف الكتروريسي شده به روش دو قطبي كشت داده ميشوند. جنس اصلي اين الياف الكتروريسي شده، از پليمر پلي كاپرولاكتون كه با كلاژن پوشش داده شده ميباشد. داربست مورد استفاده به شكل قابل توجهي زيست سازگار، زيست تخريبپذير، داراي انعطاف پذيري و نفوذ پذيري مناسب ميباشد. اين داربست به دليل هم راستا بودن الياف آن، باعث شكل گيري فيبرهاي عصبي در يك جهت و در نتيجه افزايش عملكرد و استحكام رشته هاي عصبي تشكيل شده ميشود. سپس داربست، درون كاندوئيت هاي ساخته شده به روش قالب گيري قرار ميگيرند.
سودوموناس آئروژينوزا يك باكتري پاتوژن فرصت طلب بيمارستاني است كه به علت دارا بودن مقاومت ذاتي و اكتسابي به آنتي بيوتيك هاي معمول مرگ و مير ناشي از عفونت هاي آن بسيار شايع مي باشد. در حال حاضر از جمله روش هايي كه در آزمايشگاه هاي باليني جهت شناسايي اين باكتري به كار مي رود مي توان به تست هاي فيزيكو- شيميايي استاندارد اشاره نمود كه هزينه بالا و زمان بر بودن آنها از جمله محدوديت هاي اين روش ها مي باشد. همچنين با توجه به حساسيت كم اين تست ها در برخي موارد نيز اگر تعداد باكتري كم باشد (در بيماران تحت تيمار آنتي بيوتيك يا بيماران حاوي تعداد كمي از باكتري) سبب بروز جواب كاذب منفي مي گردد. از طرفي در دهه اخير استفاده از روش هاي ملكولي به علت سريع و قابل اعتماد بودن جهت شناسايي باكتري ها بسيار مورد توجه قرار گرفته است كه از آن جمله مي توان به روش هايي مانند PCR (واكنش زنجيره اي پلي مراز)، Real time PCR و FISH (fluorescent in situ hybridization) اشاره نمود. در همه اين روش ها جهت شناسايي باكتري سودوموناس آئروجينوزا ژنهايي خاصي به عنوان هدف مورد استفاده قرار مي گيرند كه از مهمترين آن ها مي توان به ژن هاي مربوط به 16s rDNA،the internally transcribed 16S–23S rDNA spacer (ITS)، fliC ، gyrB ، toxA، oprI و oprL اشاره نمود. اين ژنها حساسيت بالايي در شناسايي سودوموناس دارند اما به غير از ژن toxA كه اختصاصي سودوموناس آئروژينوزا مي باشد ديگر ژنها با اختصاصيت كمي در ديگر سويه هاي سودوموناس نيز قابل شناسايي مي باشد. در اين كيت، به منظور شناسايي سريع باكتري سودوموناس آئروجينوزا از روش سريع و با اختصاصيت بالا بر پايه واكنش زنجيره پلي مراز چندگانه (Multiplex PCR) و با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي ژن هاي LasI ، LasR و gyrD سيستم كروم سنسينگ و همانندسازي باكتري استفاده مي شود. ژن هاي سيستم كروم سنسينگ كاملا اختصاصي گونه بوده و با توجه به نقش كنترلي كه بر بسياري از ژن هاي بيماريزاي باكتري دارند در تمامي ايزوله هاي آن موجود مي باشند.
موارد یافت شده: 5