توليد آنزيم نوتركيب فيتازمقاوم به حرارت باكاربرد صنعتي

خلاصه رفع نقص شده باكتري اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك (ETEC) يكي از عوامل اوليه اسهال در گوساله¬هاي تازه متولد شده و در برخي از گونه¬ها به عنوان مثال گوسفند و خوك مي¬باشد. هدف از اين اختراع، توليد آنتي¬بادي اختصاصي Y ضد آنتي¬ژن¬ FanC مسبب اسهال ناشي از اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك و معرفي آن به عنوان مكمل آغوز در جيره گوساله¬ها در نخستين روزهاي پس از تولد مي¬باشد. در اين پژوهش، توالي آنتي¬ژن FanC(K99) از بانك جهاني ژن بدست آمد و يك جفت آغازگر اختصاصي به منظور تكثير اين توالي نوكلئوتيدي با استفاده از نرم¬افزار Primer primer 5 طراحي گرديد. ژنوم استخراج شده از اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك به عنوان الگو در واكنش ژنجيره¬اي پليمراز مورد استفاده قرار گرفت. در پلاسميدpTZ57R/T كلون و در pET32a(+) ساب كلون شد. ناقل بياني نوتركيب به ميزبان بيان اشرشياكلي BL21CodonPlus(DE3) منتقل گرديد و پس از تخليص پروتئين نوتركيب FanC، جهت توليد آنتي¬بادي اختصاصي Y ضد اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك به مرغ¬هاي تخم¬گذار تزريق شد. تخم مرغ‌ها به مدت 8 هفته جمع آوري شدند و تخليص IgY انجام شد. IgY توليد شده در زرده تخم مرغ آنها با استفاده از روش SDS-PAGE و دات¬بلات بررسي و تأئيد شد. توان آنتي¬بادي اختصاصي در شناسايي پروتئين نوتركيب توليد شده با روش الايزا مورد بررسي قرار گرفت. كلونيگ آنتي¬ژن FanC با روش¬هاي كلوني PCR، هضم¬آنزيمي و تعيين توالي تأييد شد. توالي آنتي¬ژن FanC(K99) اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك سويه ايراني در بانك جهاني ژن با شماره دسترسي KP054295 ثبت شد. غلظت پروتئين نوتركيب FanC، 3/1 ميلي¬گرم بر ميلي¬ليتر بود. نتايج صحت آنتي¬بادي اختصاصي Y ضد اشرشياكلي انتروتكسيژنيك توليد شده را تأييد كرد. اين پروتئين توليدي مي¬تواند به عنوان مكملي همراه با آغوز در پيشگيري از سندروم اسهال ناشي از اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك در نخستين روزهاي اوليه پس از تولد فارم¬هاي دامپروري كشور مورد استفاده قرار گيرد.

اختراع "توليد نوتركيب پپتيد كايمر لاكتوفرامپين-لاكتوفراسين شتري (cLF36) و تعيين خصوصيات ضد ويروسي آن بر ويروس هپاتيت C" كه در زمينه توليد داروهاي ضد ويروسي به خصوص ويروس هپاتيت C كاربرد دارد. اين اختراع شامل توليد نوتركيب پپتيد cLF36 در سكوي بياني سلول HEK293-T و تعيين خصوصيات ضدويروسي آن بر روي ويروس هپاتيت C در شرايط آزمايشگاهي مي باشد. نتايج اين اختراع نشان مي دهد پپتيد cLF36 با دو مكانيسم عمل مي تواند مانع آلوده شدن سلوهاي كبدي به ويروس هپاتيت C در شرايط آزمايشگاهي بشود. اين مكانيسم ها شامل: 1. ممانعت از ورود ويروس هپاتيت C به داخل سلول كبدي و 2. ممانعت از رشد و تكثير سلول هاي كبدي آلوده به ويروس هپاتيت C، مي باشند.