لیست اختراعات با مالکیت
قاسم ترابي
2 عدد
خلاصه طرح استخراج ويروس و آر ان اي گياهي با استفاده از نانو ساختارهاي كربني در بين نانو ساختارهاي گوناگون نانولولههاي كربني به دليل خواص بالقوه ضد ميكروبي از اهميت ويژهاي برخوردار هستند. در بين اين خواص، فعاليت ضد ميكروبي نانولولههاي كربني به دليل مكانيسم كاملا متفاوت با ساير مواد توجه اين گروه تحقيقاتي را به خود معطوف كرده است. نانولولههاي كربني با ايجاد شكاف در ديواره سلولزي گياه و همچنين تخريب غشاء پلاسمايي سلول باعث بيرون ريختن كامل آر ان اي و دي ان اي از سلول ميشود. علاوه بر اين، نانولوله ها باعث تخريب پوشش كپسيدي ويروس (پروتئين پوششي ويروس) ميشوند. از سوي ديگر، در روش فوقالذكر مراحل استخراج ژنوم در مدت زمان بسيار كمتر نسبت به روشهاي دستي در غايب هرگونه مواد شيميايي خطرناك انجام ميگيرد. فرايند انجام گرفته جهت استخراج ژنوم گياه به شرح زير ميباشد. ابتدا برگهاي جمع آوري شده به مقدار 40 ميلي گرم در ازت مايع خرد ميشود. سپس 100 ميكرو ليتر سوسپانسيون نانولوله هاي كربني حاوي ستيل تري متيل آمونيوم برومايد با 40 ميلي گرم بافت به همراه 200 ميكرو ليتر كلروفرم مخلوط ميشود. 15 ثانيه ورتكس و 5 دقيقه روي يخ قرار داده ميشود. سپس مخلوط به مدت 15 دقيقه در دماي °C4 و 12000 دور بر دقيقه در سانتريفيوژ قرار داده ميشود. بعد از سانتريفيوژ، فاز بالايي را به يك ميكرو تيوب جديد منتقل كرده و هم حجم آن ايزو پروپانول اضافه ميشود. بعد از 4 بار سر و ته كردن، در °C 20- به مدت 30 دقيقه قرار داده ميشود. سپس سانتريفيوژ در 12000 دور بر دقيقه و براي 10 دقيقه در دماي °C4 تنظيم ميشود. بعد از اين عمليات، سوپرناتانت را حذف و با اضافه كردن يك ميلي ليتر الكل 80 درصد، حل ميشود. مجددا سانتريفيوژ در 12000 دور بر دقيقه و دماي °C4 به مدت 5 دقيقه تنطيم ميشود. بعد از اتمام سانتريفيوژ، مجددا سوپرناتانت حذف و پلت خشك ميشود. سپس آن را در 20 ميكرو ليتر آب دپسي حل و آن را در °C 80- به مدت طولاني قرار داده ميشود. باند bp 300 كه بر روي ژل آكاروز يك درصد ريخته (load) شده است، بر اساس پرايمرهاي تخصصي طراحي شدهاند و مخصوص ويروس بيت بلك اسكورچ (Beet Black Scorch Virus) ميباشند كه تاييدي بر استخراج دقيق آر ان اي ويروس مورد نظر ميباشد (شكل 1). از اين دستاورد ميتوان در ساخت كيت هاي استخراج ژنوم با كيفيت و كميت بالا در علومي همچون بيوتكنولوژي كشاورزي، گياه پزشكي، دامپزشكي، پزشكي و تمامي علوم مرتبط با بيولوژي موجود زنده استفاده كرد.
موارد یافت شده: 2