خلاصه اختراع: اختراع طراحي و ساخت كيت تشخيصي بيماري نيوكاسل(Newcastle disease)كه در گرايش بيوتكنولوژي(بيولوژي مولكولي) طرح مي شود امكان رديابي سريع بيماري نيوكاسل را ممكن مي سازد. بيماري نيوكاسل يك بيماري حاد طيور است كه از فرم خفيف تا خيلي حاد در دستگاه تنفسي طيور باعث عفونت و خونريزي مي گردد.ويروس عامل اين بيماري علايمي از فرم خفيف تا حاد با مرگ و مير حدود 100% ايجاد ميكند. لذا رديابي و كنترل آن در تشخيص به موقع بيماري از اهميت خاص برخوردار است.در طراحي و ساخت اين كيت براي اولين بار از پروتئين نوتركيب بجاي ويروس استفاده شده و به همين دليل كاربرد آن از ويژگي هاي سلامت وسريع و قابل اعتماد بودن برخوردار بوده و قادر است آنتي بادي هاي عليه ويروس نيوكاسل را اندازه گيري كند. .در طراحي اين اختراع آنتي ژن NP( نوكلئو كپسيدپروتئيني) متشكل از 500 آمينواسيد با وزن مولكولي حدود 60KD مورد استفاده قرار گرفته كه پس از تكثير و جداسازي ژن مربوطه و انتقال آن به پلاسميد مياني TRICH2 و انتقال به باكتري سويه( BL21 (D3 بيان شده و پس از تاييد بيان به وسيله تستهاي SDS-PAGE و وسترن بلات با كيت Probond Purification System"تخليص و پس از اندازه گيري غلظت و خلوص به عنوان Agمورد استفاده قرار گرفته است. در كاربرد اين كيت پروتئين نوتركيب بعنوان آنتي ژن همراه با بافر رقيق كننده به كف ميكروپليت ها چسبانيده و پس از طي دوره انكو باسيون، پليت ها توسط بافرشستشو مي شود. پس از اضافه كردن سرم و طي دوره انكوباسيون پليتها مجدداً شستشو و در مرحله بعد آنتي بادي كونژوگه با HRP اضافه ميشود. عناصر غير باند با شستشو خارج مي گردد. پس از اضافه كردن سوبستراي حاوي كروموژن و در نهايت اضافه كردن محلول متوقف كننده، تيتر آنتي بادي توسط دستگاه با طول موج nm 490 قرائت ميگردد.

خلاصه اختراع: اختراع طراحي و ساخت كيت تشخيص سريع بيماري بورس عفوني طيور (IBDV)كه در گرايش فني بيوتكنولوژي(بيولوژي مولكولي)است امكان رديابي سريع بيماري بورس عفوني طيور را ممكن مي سازد. بيماري گامبورو از جمله بيماري هاي ويروسي مهم مرغ هاي گوشتي و تخمگذار در سراسر دنيا مي باشدكه توسط ويروس خانواده بيرناويريده ايجاد مي شود و خسارت اقتصادي ناشي از بيماري به دو دليل اول تلفات و كاهش توليد و دوم اثر تضعيف كنندگي ويروس بر روي سيستم ايمني Immunosuppressive قابل توجه مي باشد. از آنجايي كه ارزيابي سرمي گله هاي مرغ به منظور تعيين زمان مناسب واكسيناسيون (در گله هاي گوشتي) و يا تعيين سطح ايمني (در گله هاي مادر) تاثير بسزايي در موفقيت كنترل بيماري دارد. لذا دستيابي به يك روش سريع جهت ميسر نمودن اين ارزيابي در پيشگيري از بروز بيماري در گله هاي طيور گوشتي و مادر كه منجر به بروز تلفات وسيع خواهد شد، از اهميت بسيار بالايي برخوردار است.در حال حاضر روش سريع ايمن اين رديابي موجود نيوده كه ضرورت طراحي يك نوع كيت تشخيصي سريع(Accelerated method) با ايمني بالاجهت رديابي امكان بروز بيماري را ميسر مي سازد.لذا اختراع فوق طراحي و ساخت كيت رديابي سريع اين بيماري در راستاي تشخيص به موقع بيماري ، تعيين زمان مناسب واكسيناسيون (در گله هاي مرغ گوشتي) و يا تعيين سطح ايمني (در گله هاي مرغ مادر) وپيشگيري از بروز اتلاف در طيور كه در صورت وقوع فراگير نيز خواهد بود،به دنبال خواهد داشت. اين اختراع ، بيولوژي مولكولي رديابي سريع بيماري بورس عفوني طيور را در بر مي گيرد.از آنجايي كه اساس اين اختراع بر مبناي استفاده از پروتيين نو تركيب كه حاصل قسمتي از ژن پروتيين هاي ساختاري ويروس بوده و در آزمايشگاه توليد و به كار گرفته شده است ،مي باشد.بنابراين خطرات كار با ويروس زنده در كار با كيت طراحي شده توسط اين اختراع از بين رفته است. در طراحي اين اختراع ابتدا سويه بيماريزاي شايع در ايران شناسايي ؛ ايزوله و تعين هويت مولكولي شده،سپس ژن VP2 و VPX (بعنوان ژن هاي حاوي بيشترين اپي تپ هاي برانگيزنده سيستم ايمني در توليد آنتي باديهاي خنثي سازي ويروس) جدا و توالي يابي شدند. در مرحله بعد ژن VPX پس از طراحي پرايمرهاي با سايتهاي اختصاصي آنزيم هاي برشي ؛تكثير و به داخل حامل بياني كلن(و نهايتا به باكتري منتقل گرديد. مراحل بيان ژن و تاييد توليد پروتيين نوتركيب با تستهاي مربوطه انجام و سپس اقدام به خالص سازي پروتيين گرديد و در نهايت خاصيت آنتي ژنيستي پروتيين مجددا با انجام Western blotبررسي گرديد.

اختراع طراحي و ساخت كيت تشخيص سريع ويروس نيوكاسل با استفاده از ذرات طلا با قطر 15-20 نانومتركه در گرايش نانو بيوتكنولوژيو بيولوژي مولكولي طرح مي شود امكان رديابي سريع ويروس بيماري نيوكاسل را ممكن مي سازد. بيماري نيوكاسل يك بيماري حاد طيور است كه از فرم خفيف تا خيلي حاد در دستگاه تنفسي طيور باعث عفونت و خونريزي مي گردد.ويروس عامل اين بيماري علايمي از فرم خفيف تا حاد با مرگ و مير حدود 100% ايجاد ميكند. لذا رديابي و كنترل آن در تشخيص به موقع بيماري از اهميت خاص برخوردار است.در طراحي و ساخت اين كيت از تركيبات نانو ذرات طلا استفاده شده وبه دليل عدم استفاده از هرگونه عامل زنده كاربرد آن از ويژگي هاي سلامت وسريع و قابل اعتماد بودن برخوردار بوده و قادر است ويروس نيوكاسل را خيلي سريع شناسايي كند. در طراحي اين اختراع پرايمرهايي از جنس DNA بصورت كاملا اختصاصي طراحي و ساخته شده است كه ميتواند بطور اختصاصي به RNAويروس چسبيده و در اتصال به ذرات طلا تغير رنگ ايجاد كرده و شناسايي گردد. در كاربرد اين كيت مواد مورد استفاده بصورت همگن در 3 tube مجزا و بصورت آماده استفاده تهيه و تعبيه شده است و سنجش مطابق دستورالعمل پيش بيني شده انجام مي گيرد، به طوري كه پس از اضافه كردن RNAاستخراجي از بافت ويا هرگونه ترشحات آلوده به Master mix و طي يك مرحله گرمايي تغيير و يا عدم تغيير رنگ را ايجاد مي كند.اين تغيير با چشم غير مسلح قابل شناسايي است.