تهيه آنتي بادي هاي نشاندار مرحله كليدي در توسعه و تكامل روش هاي ايمونواسي است. امروزه تلاشهاي گسترده و وسيعي براي توليد آنتي‌بادي هاي نشاندار در عرصه هاي تجاري و تحقيقاتي در سطح بين‌المللي صورت مي گيرد. مولكول هاي گزارشگر فلورسانس با روش هاي شيميايي به آنتي بادي متصل شده و براي اندازه گيري واكنش آنتي ژن- آنتي بادي استفاده مي شود. يكي از خصوصيات قطعه scFv اندازه كوچك آنست (30 كيلو دالتون) كه حدود 5/1 اندازه آنتي بادي كامل IgG (150 كيلو دالتون) مي باشد. اين اندازه كوچك اين امكان را به قطعه scFv مي دهد كه به عمقي ترين بافت هاي بدن نفوذ كند. بعلاوه در كارهاي عكسبرداري Imaging بصورت in vivo سريع تر از IgG توسط كليه فيلتره شده و از بدن دفع مي شود. آنتي بادي مونو كلونال نشاندار با ماده فلورسانس ايزوتيوسيانيد عليه TNF-α كاربردهاي تشخيصي و تحقيقاتي فراوان دارند. از جمله فلوسيتومتري FACS، فلورسانس ميكروسكوپي و عكسبرداري Imaging مورد استفاده قرار مي گيرد. براي توليد آنتي بادي مونو كلونال از تكنيك فاژ ديسپلي استفاده شد و خالص سازي آنتي بادي با روش كروماتوگرافي تمايلي با استفاده از پروتيين A انجام گرديد.

مقدمه: معرف كومبس يا آنتي هيومن گلوبولين كاربردهاي آموزشي - تشخيصي متعدد داشته ، در انجام آ زمايشات مختلف از جمله كومبس رايت ، كومبس مستقيم ، كومبس غير مستقيم و شناسايي آنتي ژن Du در بانك خون و نيز آموزش اين تستها به دانشجويان رشته هاي مختلف مثل،پيراپزشكي كاربرد دارد. هدف از انجام اين طرح برداشتن گامي بيشتر در جهت خودكفايي با صرف كمترين هزينه اقتصادي ميباشد. مواد و روش: براي توليد آنتي بادي پلي كلونال بر عليه ايموگلوبولين هاي انساني نياز به تهيه فراكسيون غني از ايمونوگلوبولين است. براي تهيه اين فراكسيون از آمونيوم سولفات اشباع جهت رسوب دادن ايمونوگلوبولين هاي سرمي استفاده شد. رسوب غني از ايمونوگلوبولين در كيسه دياليز با 12000cut off دالتون دياليز شد. بدليل ماهيت محلول ايمونوگلوبولين هاي انساني بعنوان ايمونوژن با ادجوانت آغشته گشته و بطور عضلاني به خرگوش تزريق شد. پس از ايمونيزاسيون كامل حيوان ، خونگيري از حيوان صورت گرفته و سرم غني از آنتي هيومن گلوبولين جهت بررسيهاي بعدي جدا گرديد. نتايج: نتيجه تست دابل ديفيوژن نشان داد كه يك خط رسوبي واضح كه ناشي از واكنش بين آنتي ژن و آنتي بادي است ، بوجود مي آيد. دانستيه خط رسوبي فوق بيانگر بهتر و بيشتر ايمون شدن خرگوش مي باشد. براي تائيد نتيج فوق از تست كومبس رايت استفاده گرديد و آنتي سرم با رقت 200 همانند معرف كومبس استاندارد در كومبس رايت جواب قابل قبول و خوب بدست داد، كه بيانگر تيتر بالاي محصول توليدي است. باين ترتيب از هر خرگوش ايمون شده ميتوان حدود 10 ليتر معرف كومبس توليد نمود كه از نظر اقتصادي مقرون به صرفه است. بحث:براي اطمينان از توليد آنتي بادي پلي كلوبال بر ضد ايمونوگلوبولين انساني (معرف كومبس) تست اخترلوني يا دابل ديفيوژن كه يك تست كيفي است انجام شد. نتيج تست كه اساسا مبتني بر انتشار آنتي ژن و آنتي بادي در ژل ميباشد ، نشان داد كه يك خط رسوبي واضح كه حاصل واكنش بين آنتي ژن و آنتي بادي است ، بوجود مي آيد. براي تعيين تيتر آنتي بادي توليدي ، آنتي سرم خرگوش رقيق شد و تست كومبس رايت با استفاده از آنتي سرم رقيق شده انجام گرديد. نتايج نشان داد كه محصول توليدي در تائيد نتايج تست دابل ديفيوژن بوده و قابل مقايسه با استاندارد خارجي مي باشد . باين دليل كه وقتي سرم خرگوش ايمون شده 200 بار رقيق شد همانند مشابه خارجي قادر به ايجاد آگلوتيناسيون واضح در آزمايش كومبس رايت گرديد.

آنتي بادي ضد ايمونو گلوبولين هاي سگ (Anti - dog lgs) معادل معرف كومبي انساني بوده و كاربردهاي تشخيصي - آموزشي فراواني دارد كه از جمله آنها مي توان به انجام آزمايشاتي مثل كومبس رايت در سگهاي مبتلا به بروسلاي ناشي از (Brucella canis) اشاره نمود . بعلاوه در تشخيص و آموزش آزمايشاتي مثل كومبس مستقيم ، كومبس غير مستقيم و دابل ديفوزيون به دانشجويان رشته هاي مختلف از جمله پزشكي ، داروسازي و دامپزشكي نيز كاربرد دارد. از anti- lgs كونژوگه با پراكسيداز مي توان براي طراحي كيت الايزايي به هدف تشخيص ليشمانيوز جلدي و احشايي نيز استفاده نمود. هدف از انجام اين طرح برداشتن گامي بيشتر در جهت خودكفايي كشور با صرف كمترين هزينه اقتصادي مي باشد. براي توليد آنتي بادي پلي كلونال عليه ايمونوگلوبولين هاي سگ نياز به ماهيتا محلول مي باشد لذا براي پايداري آنها در بدن با ادجوانت آغشته گشته ، بطور زير جلدي و عضلاني به خرگوش تزريق شد. پس از ايمونيزاسيون حيوان طي يك دوره زماني مشخص ، به منظور دست يابي به سرم غني از آنتي ايمونوگلبولين هاي مورد نظر ، خون گيري از خرگوش به عمل آمد. در اين تستها واكنش ناشي از آنتي ژن و آنتي بادي به ترتيب به صورت خط سفيد شارپ و رسوب حلقه اي واضح نمايان بود. جهت سنجش دقيق ميزان آنتي بادي پلي كلونال از تست الايزاي طراحي شده نيز استفاده شد. تيتر سرم خرگوش ايميون در اين تست4000 تعيين گرديد. نتيجه تست اخترلوني نشان داد كه يك خط رسوبي واضح در وسط چاله مربوط به آنتي ژن و آنتي بادي بوجود مي آيد كه حاكي از خوب ايميون شدن حيوان بود. نتيج تست SRID در تائيد نتايج دابل ديفوزيون بود چرا كه منجر به تشكيل حلقه رسوبي واضح ناشي از واكنش آنتي ژن- آنتي بادي شد. در نهايت نتيج تيتراسيون با تست الايزاي طراحي شده نيز در تائيد نتايج دابل ديفوزيون و SRID بود چرا كه تيتر 4000 در الايزا حاصل شد كه بيانگر اقتصادي بودن محصول توليدي بود.

هموليزين كاربرد تشخيصي - آموزشي متعدد داشته كه از جمله آنها سنجش عملكرد اجزايكمپلمان در قالب انجام تست CH50 و آموزش عملي اين تست براي دانشجويان مقاطع كارشناسي ارشد و PHD رشته هاي مختلف مثل ايمونولوژي و بيوشيمي است . هدف از انجام اين طرح توليد هموليزين در راستاي خودكفايي با كمترين هزينه اقتصادي مي باشد. براي توليد هموليژين در خرگوش از گلبول هاي قرمز گوسفند (SRBC) به عنوان ايمونوژن براي بدن خرگوش استفاده مي شود . خون هپارينه از چندين گوسفند تهيه شده و با يكديگر مخلوط (POOLED) گرديد. سپس با سرم فيزيولوزي شستشو داده شده و با استفاده از CELL COUNTER شمارش گرديد و به تعداد 1-5*10 9 بطور داخل ذوريدي (IV) به خرگوش تزريق شد. هفت الي ده روز بعد از تزريق كه اوج توليد آنتي بادي پلي كلونال از كلاس IgM مي باشد خونگيري از خرگوش به عمل آمد و سزم غني از هموليزين جدا گرديد. در راستاي سنجش عملكرد هموليزين و استاندارد نمودن آن ، هموليزين تيتر گرديد. براي تعيين اينكه در چه تيتيري از هموليزين ، گلبول هاي قرمز فقط حساس مي شوند و نه آگلوتينه ، رقتهاي مختلفي از هموليزين تهيه و روي حجم ثابتي از SRBC اضافه گرديد. نتايج نشان داد كه تيترهموليزين توليدي 2560 بود. يعني با رقت 2560 نيز قادر به حساس كردن SRBCs به هدف بررسي عملكرد اجزاي توتال كمپلمان بود. براي اطمينان از عملكرد در حد استاندارد تست ch50 با استفاده داز هموليزين توليدي و هموليزين استاندارد (SIGMA) به عمل آمد نتايج نشان داد كه هموليزين توليدي با تيتر 2560 همچون هموليزين استاندارد قادر به حساس كردن گلبولهاي قرمز گوسفند مي باشد. تيتر بالاي هموليزين توليدي در مقايسه با تيتر هموليزين استاندارد دال بر اهميت و اقتصادي بودن محصول توليدي دارد. بنابراين هموليزين توليدي يك محصول مفيد بوده و در اهداف تشخيصي داراي اهميت مي باشد. گل وازگان : آنتي بادي پلي كلونال ، گلبول هاي قرمز گوسفند