در اين مطالعه، آنزيم D-لاكتات دهيدروژناز به صورت تك مرحله اي به صورت فعال و محلول توليد شد. براي توليد اين آنزيم ابتدا توالي ژن كد كننده ي آنزيمD –لاكتات دهيدروژناز در بانك ژن پايگاه NCBI با عدد دسترسي(EC 1.1.1.28) يافت شد. سپس بر اساس ترجيح كدوني ميزبان باكتريايي Ecoli سويه ي BL21 با استفاده از نرم افزار Geneious و نيز وب سايت هاي Jcat و IDT تغييرات لازم انجام شد. سپس توالي مورد نظر بعد از طراحي به شركت Biobasic سفارش داده شد. بعد از تحويل گرفتن توالي سنتز شده در داخل وكتورPUC ، مراحل كلونينگ براي انتقال ژن به داخل وكتور بياني pET28a انجام شد. به منظور توليد پروتئين نوتركيب ، باكتري هاي حامل وكتور نوتركيب در محيط كشت TB به مدت 10 ساعت در دماي 18 درجه سانتي گراد با غلظت 1 ميلي مولار IPTG القا شدند. پس از توليد پروتئين و خالص سازي آن با استفاده از ستون كروماتوگرافي ميل تركيبي نيكل-سفارز، به منظور اطمينان از تاخوردگي صحيح و تعيين فعاليت آنزيم نوتركيب توليد شده ، از كاهش جذب NADH در حضور پيروات و آنزيم مذكور در طول موج 340 نانومتر استفاده شد. . نتايج حاصل از فولد صحيح و عملكردي بودن پروتئين نشان مي دهد كه اين پروتئين براي كاربردهاي پزشكي و ساخت بيوسنسورهاي تشخيصي و همچنين استفاده در صنايع گوناگون وابسطه به D-LDH مناسب است. در ضمن در اين مطالعه با استفاده از استراتژي هاي مختلف، موفق به كاهش هزينه تمام شده توليد نوتركيب اين پروتئين شديم كه از نظر اقتصادي بسيار با اهميت است. از جمله استراتژي ها مي توان به مهندسي سويه جهت توليد حداكثري پروتئين و نيز استفاده از ميزبان باكتريايي كه داراي رشد و تكثير سريع و نيز پايين بودن قيمت محيط كشت جهت رشد باكتري اشاره كرد. آنزيم D-LDH نو تركيب توليد شده در اين مطالعه داراي غلظت متوسط 205 ميلي گرم بر ليتر پروتيئن خالص سازي شده مي باشد كه از بالاترين غلظت هايي است كه تاكنون گزارش شده است.