1-با توجه به افزايش روز افزون تحقيقات در زمينه سرطان و ساخت تركيبات شيمي درماني جديد ، توانايي اين داروها در القاي مرگ سلولي يك اصل اوليه و بسيار مهم در بررسي كيفيت و تاثيرگذاري آن ها مي باشد. 2-بررسي ميزان القاي مرگ سلولي در مراحل اوليه اولويت دارد زيرا زماني كه سلول وارد فاز آپوپتوز(مرگ سلولي) مي شود، اولين اتفاق درمراحل اوليه ي مرگ سلولي ، جابجا شدن و انتقال فسفاتيديل سرين از سمت داخلي غشاي پلاسمايي به سمت بيروني غشا است كه دراين صورت اين تركيب در معرض قرار مي گيرد و هنوز يكپارچگي غشاي سلول حفظ شده و غشا همچنان يكپارچه و پايدار است. 3-تشخيص افتراقي آپوپتوز از نكروز، اصلي مهم است و سنجش فسفاتيديل سرين ها در آپوپتوز اختصاصيت دارد. براي بررسي آپاپتوز در سلولها چند روش بكار ميرود كه عبارتند از : 1- ژل الكتروفورز 2- ميكروسكوپ الكتروني 3- ميكروسكوپ نوري 4- نشاندار كردن قطعه انتهايي 5- تكنيك هاي فلوئورسنس 6- نشان دار كردن با فسفاتيديل سرين از آنجايي كه در مراحل اوليه آپاپتوز، فسفاتيديل سرين از سطح داخلي غشاء پلاسمايي به سطح خارجي آن منتقل مي شود و در آنجا براي رساندن پيام مرگ به سلولهاي مجاور فاگوسيتهاي عملكردي جهت بلعيدن سلول عمل مي نمايند، در روشي جديد براي نشان دادن سلول هاي آپاپتوزي ، Annexin V كه عضوي از خانواده انكسين ها است را بكار مي برند. Annexin با واسطه ++ ca مي تواند به فسفو ليپيد متصل شود و براي نشان دادن سلولهاي آپاپتوزي در محيط هاي كشت و يا مقاطع بافتي كه توسط FITC- AnnexinVفيكس شده اند، بكار برود. سنجش مرگ برنامه ريزي شده ي سلول از طريق پروب Annexin V-FITC بر اين اساس استوار است كه در مراحل اوليه ي مرگ برنامه ريزي شده ي سلول ، تغييراتي در سطح سلولي اتفاق مي افتد. يكي از اين تغييرات، جابجا شدن و انتقال فسفاتيديل سرين از سمت داخلي غشاي پلاسمايي به سمت بيروني غشا است كه دراين صورت اين تركيب در معرض قرار مي گيرد و از آنجايي كه انكسينv پروتئيني وابسته به كلسيم با تمايل بسيار بالا براي اتصال به فسفاتيديل سرين مي باشد، با انتقال فسفاتيديل سرين بر روي سطح غشا ، اتصال بين اين فسفوليپيد و انكسينV اتفاق مي افتد. درنتيجه اگر پروتئين انكسينV به يك تركيب فلوئورسنت متصل باشد ميتوان اتصال آن به فسفاتيديل سرين را تشخيص داد. در طراحي اين پروب، از تكنولوژي كانژوگه كردن تركيب فلوئورسنتFITC به پروتئين انكسينV استفاده شد. از آنجايي كه بهم خوردن تقارن غشا و انتقال فسفاتيديل سرين از سمت داخلي غشا به سمت بيرون در مراحل اوليه مرگ سلولي اتفاق مي افتد ، تشخيص به موقع و زود هنگام مرگ سلولي توسط اين پروب براي بررسي تركيبات و داروهاي شيمي درماني امري اجتناب ناپذير و مهم مي باشد. بعد از تيمار سلول ها با استفاده از داروهاي شيمي درماني همانند دوكسوروبيسين و شروع فرآيند القاي مرگ سلولي ، براي بررسي درصد مرگ سلولي از پروب انكسين FITC- استفاده شد. نتايج به دست آمده نشان دهنده ي كارايي بالاي اين پروب در تشخيص سلول هاي آپوپتوي وافتراق آن ها از سلول هاي نكروزي مي باشد.

آنزيم DT- ديافوراز عضوي از خانواده¬ي اكسيدوردوكتازها به شمار مي ‏آيد كه آنزيمي بسيار پراهميت در زمينه ي تشخيص و درمان به شمار مي رود. به دليل اهميت ويژه ي آنزيم ديافوراز در زمينه هاي مختلف همانند كيت هاي تشخيص طبي و صنايع غذايي و نساجي و مشكل بودن امكان توليد اين آنزيم و درنتيجه قيمت بالاي آن، توليد آن به روش نوتركيب بسيار مفيد و ارزشمند است. لذا جهت توليد ، توالي ژني آنزيم مربوطه در بانك ژني پايگاه NCBI يافت شده و سپس بر اساس ترجيح كدوني ميزبان باكتريايي Ecoli سويه¬ي BL21 با استفاده از نرم افزار Geneious ، تغييرات لازم ايجاد شده و سپس توالي ژني مهندسي شده ي مورد نظر جهت سنتز به شركت بيوبيسيك سفارش داده شد. توالي سنتزشده پس از تحويل به درون وكتور Pet28a انتقال داده شد. وكتور نامبرده حامل سازه ژني اين آنزيم ، به درون باكتري BL21 ترانسفورم شده و آنزيم ديافوراز توليد شد. درطراحي سازه ژني اين آنزيم از برچسب هيستيديني استفاده شده است، درنتيجه براي تخليص آنزيم و جداسازي آن از ميان پروتئين هاي سلول باكتري ، از روش كروماتوگرافي ميل تركيبي ((affinity chromatography ستون نيكل-سفاروز استفاده شد. بر اساس ميل تركيبي بالاي دم هيستيديني ديافوراز به نيكل ، جداسازي صورت گرفته و شستشو توسط بافر حاوي ايميدازول انجام مي گيرد. جهت تاييد توليد و همچنين بررسي ميزان خلوص آنزيم به دست آمده از روش الكتروفورز ژل پلي اكريل آميد سديم دودسيل سولفات (SDS PAGE) استفاده شد. با مهندسي سازه ژني آنزيم ديافوراز و بهينه سازي شرايط محيط كشت و دماي مناسب جهت توليد آنزيم، هم چنين استفاده از پلازميد و ميزبان باكتريايي مناسب ، آنزيم نوتركيب ديافوراز با خلوص 96درصد توليد گرديد كه از نظر اقتصادي بسيار موردتوجه و ارزشمند است. پس ازتوليد و تخليص آنزيم ديافوراز ، به منظور تست آنزيم مربوطه و بررسي ميزان كارايي آن سنجش فعاليت آن با استفاده از دستگاه اسپكتروفتومتري جذبUV انجام شد كه نتيجه بررسي ها نشان داد كه آنزيم مورد نظر داراي قدرت تشخيص و كارايي بسيار بالايي است.