كنترل توان ايمني بخشي و يا پتانسي واكسن هاي هاري و ارزشيابي آنها از مهمترين اهداف توليد كنندگان واكسن براي كنترل كيفي محصول شان به شمار مي رود و قدرت اثر بخشي واكسن براي سازمان هاي ناظر دولتي و بهداشت جهاني (WHO) از اهميت ويژه برخوردار است تا محصول موثر و ايمن تحويل بازار مصرف شود. يكي از قديمي ترين روش هايي كه تاكنون نيز به عنوان استاندارد براي كنترل پتانسي واكسن هاري مورد استفاده قرار مي گيرد روش استاندارد و رايج NIH مي باشد. اين روش در طي سال هاي متمادي به دلايل متعددي مورد انتقاد مراجع علمي و همچنين آزمايشگاه هاي كنترل واكسن قرار گرفته است. عمده ترين مشكلات اين روش متغير بودن نتايج تست به دليل وسعت دامنه تغيير بين 25-400 و نياز به تكرار آزمون و تعيين ميانگين، زمانبر بودن تست (حداقل 28 روز) و استفاده از تعداد زيادي حيوان براي انجام هر تست (200 سر موش). از اين رو WHO يكي از اصلي ترين اهداف خود را دستيابي به تست هاي مناسب in vitro جهت جايگزيني با تست هاي in vivo مانند NIH قرار داده است. آزمايش اتصال آنتي بادي (ABT) اساسا جزو آن دسته از تستهايAntigenic Quantification مي باشد كه با توجه به روش اجرا به ارزيابي محتواي آنتي ژنيك واكسن و از طريق خنثي سازي سرم ضد هاري حاوي آنتي بادي نوتراليزان مي پردازد و روشي دقيق، سريع واقتصادي مي باشد. با اين وجود روش ABT نيز محدوديت هايي را داراست از قبيل: 1- وابسته به تكنسين مي¬باشد 2- روش خواندن اين روش كيفي مي¬باشد 3- در اين روش از روي تيتر ويروس به ميزان آنتي بادي هاي خنثي شده توسط واكسن پي برده مي¬شود در صورتي كه بتوان ميزان اين آنتي بادي هاي خنثي شده را به صورت مستقيم اندازه گيري نمود دقت اين روش بالاتر خواهد رفت. بنابراين اگر بتوان با طراحي روشي نوين بر مشكلات ذكر شده روش ABT فائق آمد و همزمان از مزاياي آن استفاده نمود، مي توان به يك روش ارزشمند جهت تعيين ايمني بخشي واكسن هاري دست يافت. بدين منظور پيشنهاد مي شود در روش ABT بجاي محاسبه تيتر ويروس، به طور مستقيم تيتر آنتي بادي خنثي نشده با روش(Rapid fluorescent Focus Inhibition Test) RFFIT اندازه گيري شود. با ادغام دو روش ABT و RFFIT كه روشي جديد بوده و از اين به بعد بنام روش ABT-RFFIT ناميده خواهد شد، مي توان مشكلات ذكر شده در مورد تست ABTرا رفع نمود. بدين صورت كه در مرحله انتهايي روش ABT به جاي اندازه گيري تيتر ويروس و محاسبه تيتر آنتي بادي خنثي نشده به طور غير مستقيم، از روش RFFIT براي محاسبه مستقيم تيتر آنتي بادي خنثي نشده مي توان استفاده كرد. يكي از مزيت هاي مهم اين روش اين است كه خوانش اين روش به صورت كمي بوده، در نتيجه داده هاي حاصل از آن نسبت به روش ABT بسيار دقيق تر مي باشد. اما معضل مهم اين است كه مرحله خوانش در روش RFFIT به صورت چشمي بوده، در نتيجه غير دقيق، وابسته به تكنسين، طاقت فرسا و زمان بر مي باشد. جهت رفع اين مشكلات مي توان در مرحله خوانش از روش حساس فلوسايتومتري بهره برد. مي توان از اين روش كه از اين به بعد روش ARF (ABT-RFFIT-Flow) ناميده مي شود در تعيين توان ايمني بخشي واكسن هاي هاري بهره برد. اين روش قدرت مقايسه پذيري را بالا برده و مشكلات و معضلات تست NIH را نخواهد داشت. از مزاياي مهم ديگر مدت زمان انجام تست نسبت به NIH بوده كه به يك تا دو روز كاهش مي يابد. به طور خلاصه اين روش ها در مقايسه با روش NIH، بسيار كم هزينه¬تر، مطلوب¬تر و كاربردي¬تر مي باشند.

زمينه فني اختراع: اين اختراع مربوط مي شود به تهيه نانوذره نقره با استفاده از عصاره گياه اكاليپتوس به عنوان عامل احياء كننده و استفاده از اين نانوذره به عنوان ادجوانت در فرمولاسيون واكسن دامي هاري.  شرح مختصر بيماري هاري يك انسفالوميليت حاد ويروسي است كه غير قابل درمان بوده و در صورت ابتلاء، كشندگي آن حتمي مي باشد. براساس برآوردهاي رسمي سالانه بيش از 60000 نفر از هاري مي ميرند كه 95% آن در آسيا و آفريقا رخ مي دهد. هاري يك بيماري قابل پيشگيري بوده و يكي از اصلي ترين راهكارهاي كنترل بيماري هاري واكسيناسيون مي باشد. از گذشته براي بهبود تاثير واكسن در مقابله با عفونت ها استفاده از ادجوانت ها ضروري بوده هست. يكي از پركاربردترين ادجوانت ها، هيدروكسيد آلومينيوم (آلوم) است كه در ايالات متحده تركيبات آلوم به صورت گسترده در توليد واكسن ها مورد استفاده قرار مي گيرد و در حال حاضر از اين ادجوانت در توليد واكسن هاري دامي استفاده مي شود. پيشرفت هاي اخير در زمينه نانوبيوتكنولوژي به ويژه توليد نانوذره هاي فلزي با اندازه و شكل خاص، منجر به توسعه عوامل گوناگون با كاربردهاي مختلف شده است. يكي از ويژگي هاي نانوذرات توانايي به دام انداختن يا جذب مولكولهايي مانند نوكلئيك اسيدها و پروتئين ها هستند، از اين رو سيستم واكسيناسيون بر پايه نانوذرات باعث ايجاد فرصت هايي براي كنترل تحويل آنتي ژن به سلول هاي ايمني مورد نظر شده است. با توجه به اثرات بالقوه ادجوانتي نانوذرات نقره و همچنين سنتز آسان اين نانوذرات با استفاده از عصاره گياهي اكاليپتوس در اين مطالعه توانايي نانوذرات نقره در افزايش پاسخ هاي ايمني به عنوان ادجوانت عليه واكسن هاري دامي بررسي شد.  كاربردها: با توجه به اثرات ادجوانيسيته نانوذره نقره، از اين نانوذره مي توان در صنعت واكسن سازي به عنوان ادجوانت استفاده نمود.  مزيت ها: 1- سنتز آسان و ارزان 2- عوارض جانبي بسيار كم 3- تحت كنترل بودن سنتز نانوذره نقره از نظر اندازه 4- انواع انواع تغييرات دلخواه و مورد نياز بر روي نانوذره نقره

در حال حاضر از هيدروكسيد آلومينيوم (آلوم) در توليد واكسن هاري دامي استفاده مي شود. واكسن هاي بر پايه آلوم در القا پاسخ هاي ضد ويروسي موثر نيستند. از اينرو ادجوانت هاي جديد جهت افزايش ايمونوژنيسيته آنتي ژن هاي ضعيف به خصوص آنتي ژن هاي ويروسي، القاء حداقلي اثرات جانبي، تحريك طولاني مدت پاسخ هاي ايمني نياز است. با توجه به توانايي نانودندريمرها در به دام انداختن يا جذب مولكولهايي مانند نوكلئيك اسيدها و پروتئين ها، سيستم واكسيناسيون بر پايه نانودندريمر باعث ايجاد فرصت هايي براي كنترل تحويل آنتي ژن به سلول هاي ايمني مورد نظر شده است. با توجه به سنتز آسان اين نانودندريمرها ، در اين اختراع نانودندريمر نسل 2 ساخته شده بر پايه اسيد سيتريك در فرمولاسيون واكسن هاري دامي مورد استفاده قرار گرفتند و توانايي آن در افزايش پاسخ هاي ايمني به عنوان ادجوانت عليه واكسن هاري دامي نشان داده شد.

اگزوتوكسين سودوموناس بطور گسترده در تهيه ايمنوتوكسين ها استفاده مي شود. در اين گونه موارد، قسمت بايندينگ از توكسين حذف و با يك آنتي بادي يا ليگاند جايگزين مي شود. اما توليد و نگهداري ايمونوتوكسين ها بسيار مشكل و هزينه بر است. همچنين استفاده از آنتي بادي ها يكسري محدوديت هايي را شامل مي شود. امروزه با گسترس علم نانوتكنولوژي، تحويل داروهاي ضد سرطاني و همچنين استفاده از حداقل غلظت داروها به گونه اي كه اثرات سمي دارو روي سلول هاي طبيعي كاهش يابد و سبب پايداري بالاي دارو شود، اهميت زيادي پيدا كرده است. از اين رو جهت تحويل اختصاصي دارو به بافت سرطاني و كم نمودن عوارض جانبي آن از نانوذرات به عنوان حامل مي توان كمك گرفت. در اين اختراع، قسمت كاتاليتيك پروتئين اگزوتوكسين سودوموناس آئروژينوزا (PE38) ابتدا با مهندسي ژنتيك توليد شد. سپس از نانوذره نقره سنتز شده به روش سبز به عنوان حامل استفاده شد و اين پروتئين بر روي اين نانوذرات بارگذاري شدند و يك نانوتوكسين تهيه گرديد و اثرات سايتوتوكسيك آن مورد ارزيابي قرار گرفت.

ابتدا باكتري S.equisimilisگروه G شناسايي شده است كه تا كنون گزارشي مبني بر حضور يا استخراج آنزيم HAS اعلام نشده است. براساس سكانس DNA كدكننده آنزيم HAS از باكتريG88 S. equisimilis و با ستفاده از نرم افزارهاي پيش‌بيني كننده موقعيت پروتئين در سلول نظير TMHMM Server v. 2.0 موقعيت پروتئين has در سلول شبيه ‌سازي ‌شده و موقعيت آمينواسيدهاي ابتدا و انتها دمينها از جمله دمين درون‌سلولي جهت طراحي آغازگرها به دست آمد و با نرم‌افزار GeneRunner V6.1 آغاز‌گر‌ها شناسايي شدند. سپس فرمهاي كوتاه شده و كامل آنزيم به وسيله PCR تكثير، كلون و توالي¬يابي شد. پس از آن به باكتري E.coli انتقال يافته و بيان آنزيم ها انجام شد. پس از تخليص و تاييد از غشا سلولي، كارايي آنزيمها به¬صورت جداگانه و همچنين آنزيم كامل براي توليد HA مورد بررسي قرار گرفته و نشان داده شده است كه كليه فرمهاي كوتاه شده داراي فعاليت آنزيمي مي باشند هر چند نسبت به فرم كوتاه كاهش فعاليت وجود دارد. همچنين مشخص شد كه دمين درون سلولي اين آنزيم بخش فعال آن در توليد HA بوده بدون نياز به سلول و در شرايط In vitro و بدون وابسته بدون به غشا سلولي مي¬تواند در حضور سوبستراي اوليه و ايجاد شرايط بافري مناسب HA فرايندهاي اتصال به مونوساكاريدي و پليمريزاسيون آنها را انجام دهد اين اولين گزارش در مورد توليد In vitro با استفاده از كوتاه ترين فرم آنزيم هاي پليمريزه كننده HA جهت بيوسنتز اين بيوپليمر ارزشمند مي باشد. همچنين ساير فرمهاي كوتاه شده با حذف دمين هاي غشايي داراي فعاليت مي باشند كه فعاليت فرمهاي HAS23, HAS2, HAS3 اين امكان را براي توليد فرمهاي تثبيت شده اين اشكال در سطح ليپوزوم و اتصال يك طرفه و يا دوگانه دمين هاي غشايي و بررسي كارايي سيستم هاي قابل بازيابي جهت توليد يكنواخت و طولاني مدت و به صرفه اقتصادي را فراهم خواهد آورد.