Bacillus anthracis يكي از مهمترين عوامل از نظر اهميت در كاتگوري A قرار گرفته است. از آنجايي كه اين بيماري عفوني كشنده است مي تواند براي استفاده در سلاحهاي زيستي بسيار ايده آل باشد زيرا توليد اين عامل در مقادير عظيم بسيار ساده بوده نيمه عمر طولاني داشته و نيز در محيط پايدار است. اين فاكتورها از مهمترين علل كاربرد اين باكتري در حملات بيوتروريستي و جنگ ميكروبي بوده و مرگ و مير ناشي از آن در موارد درمان نشده 100% مي باشد. در اين اختراع براي هر يك از سكانس هاي اختصاصي (pag,cap) باكتري پرايمر طراحي شد نمونه ها كلون گرديد و سپس با نمونه هاي كنترل منفي ارزيابي شد. سپس پس از انجام واكنش نمونه ها الكتروفورز گرديد كه نمونه براساس وزن هاي نوكلئوتيدي مختلف كه طراحي شده بود از يكديگر تفكيك شد. استاندارد طلايي براي تشخيمص قطعي ارگانيسم مورد بحث تستهاي معمول باكتريولوژيك همانند كشت مي باشد در صورتي كه كشت باكتري مستلزم صرف زمان و هزينه بالايي بوده و نيازمند شرايط امنيت زيستي سطح 4 مي باشد و از سوي ديگر كنترل و مانيتورينگ سياه زخم بخصوص فرم تنفسي بيماري كه به دنبال استنشاق آئروسلهاي عفوني به سرعت منتشر مي شود بسيار حائز اهميت مي باشد. لذا تشخيص سريع قطعي و دقيق بيماري در نمونه هاي باليني بدست آمده از افراد بيمار و يا مشكوك بر پايه تكنيكها و روشهاي تشخيص مولكولي سريع با هدف شناسايي به موقع عامل در مدت زمان كوتاه و عدم نياز به امكانات پيشرفته هدف اصلي مطالعه حاضر قرار گرفته است.

خلاصه توصيف اختراع : ساخت كيت تشخيص مولكولي پي سي آر براي شناسايي ويبرتيو كلرا بر اساس سكانس هاي اختصاصي باكتري وبا بيماري امست كه از طريق آب توسط باكتري وببريو كلرا ايجاد مي شود. اين بيماري در گذشته در ايران به نام مرگامرگي خوانده مي شده است اين باكتري با نوشيدن آب آلوده يا خوردن ماهي نپخته يا خوردن صدف ها وارد بدن مي شود. در ايران بيشترين راه انتقال وبا، سبزي هاي آلوده است. سبزي هايي كه در هنگام كاشته شدن با كود انساني (پساب) تغذيه مي شوند داراي بيشترين آلودگي هستند. وبا در طول تاريخ هفت بار همه گيري جهان گستر داشته است. در قرن نوزدهم چندين بار در اروپا همه گير شد اما امروزه وبا بيشتر در كشورهاي جهان سوم به علت وضعيت ناسالم و غير بربهداشتي آبهاي آشاميدني ديده مي شود. در اين اختراع براي هر يك از سكانس هاي اختصاصي ( CTX B ) باكتري پرايمر طراحي شد نمونه ها كلون گرديد و سپس با نمونه هاي كنترل منفي ارزيابي شد.سپس پس از انجام واكنش نمونه ها الكتروفورز گرديد كه نمونه بر اساس وزن هاي نوكلئوتيدي مختلف كه طراحي شده از يكديگر تفكيك شد. عليرغم موفقيت هاي نسبي بدليل وجود برخي مشكلات علمي و اقتصادي وفرهنگي هنوزدردمهاركامل اين عامل باكتريايي محققين موفق نبوده اند بنابراين يك روش سريع و حساس جهت تشخيص اوليه و كنترل بيماري مورد نياز مي باشد. روشهاي مورد استفاده در آزمايشگاه هاي ميكروبيولوژي جهت شناسايي عامل بيماري وبا بستگي به ويژگيهاي باكتريولوژيك (مورثولوژيك ، بيوشيميايي و ... )استفاد، ميشود. اما همه اين روشها داراي معايب خاص خوداز قبيل صرف زمان ، عدم امكان تشخيص تعداد زياد نمونه در يك زمان محدود وعدم دقت لازم هستند.

خلاصه ساخت كيت تشخيص مولكولي پي سي آر براي شناسايي فراسيسلا تولارمي بر اساس سكانس هاي اختصاصي باكتري تولارمي نوعي بيماري ميكروبي مشترك بين انسان و حيوانات است. كه براساس راه ورود و ميزان ويرولانس عامل بيماري داراي تظاهرات باليني گوناگوني در انسان ميباشد. Francisella tularensis را به عنوان يكي از جنگ افزارهاي بيولوژيك خطرناك تلقي نموده اند زيرا داراي خاصيت عفونت زايي شديد، قابليت انتشار آسان و ظرفيت بالاي ايجاد بيماري و مرگ ميباشد . در اين اختراع براي هر يك از سكانس هاي اختداصي ) tul4 و fopA ( باكتري پرايمر طراحي شد نمونه ها كلون گرديد و هپس با نمونه هاي كنترل منفي ارزيابي شد.سپس پس از انجام واكنش نمونه ها الكتروفورز گرديد كه نمونه بر اساس وزن هاي نوكلئوتيدي مختلف كه طراحي شده بود از يكديگر تفكيك شد. عامل بيماري ،تولارمي بوده وبه مقدار فراوان در حيوانات آلوده يافت شده و از طريق نيش حشرات، تماس مستقيم با بافت آلوده حيوان، استشاق گرد و غبار يا قطرات آلوده، خوردن غذاي آلوده .به عامل بيماري و يا نوشيدن آب آلوده به انسان انتقال مي يابد. تولارمي يك بيماري زئونوز )مشترك بين انسان و حيوان( بوده و بسيار خطرناك مي باشد. مرگ و مير در اين بيماري بسيار بالا بوده و واكسن مناسبي بر عليه آن وجود ندارد. از نظر خطرناك بودن به دليل قابل استفاده بودن به صورت سلاح جنگي در بيوتروريست در كاتگوري A قرار مي گيرد.

E.coli و در كل جهان، به عنوان يك ماركر تشخيصي آلودگي هاي مدفوعي به شمار مي آيد. در اشرشياكلي روابط پيچيده اي بين فاكتورهاي دفاع ميزباني و فاكتورهاي ويرولانس باكتري وجود دارد . و هم چنين شاخص هاي ويرولانس در هر يك از تيپ هاي پاتوژنيك اثر اشرشياكلي متفاوت است. multiplex PCR روشي است كه مي توان چندين ميكروارگانيسم را با هم جستجو كرد. در اين اختراع با كمك چندين توالي پرايمر در يك واكنش به طور اختصاصي جستجوي باكتري ها انجام مي شود. اين تكنيك پروسه شناسايي را نيز كوتاه تر مي كند. ما در اين اختراع براي هر يك از سكانس هاي اختصاصي (Stx2, aff II, st, lt, bfpA Stx1) پاتوتايپ ها پرايمر طراحي شد نمونه ها كلون گرديد و سپس با نمنه هاي كنترل منفي ارزيابي شد. سپس پس از انجام واكنش نمونه ها الكتروفورز گرديد كه نمونه بر اساس وزن هاي نوكلئوتيدي مختلف كه طراحي شده بود از يكديگر تفكيك شد. نتايج بررسي شده با اين متد براي هر يك از ژن ها پس از انجام تست طراحي شده شامل قطعات تكثير يافته دقيقي است كه اين ژن هاي اختصاصي را از هم تفكيك مي كند كه شامل باندهاي 586bp, 329bp, 459bp, 150bp, 218bp, 384bp به ترتيب براي ژن هاي bfp, stxl, stx2, aafII, Lt, St مي باشد. با توجه به اينكه امروزه از تست هاي كلاسيك و تكنيك هايي كه براساس فنوتيپ است براي شناسايي عامل اسهال استفاده مي شود، اغلب قادر به شناسايي و تشخيص همه انواع پاتوتيپ E.coli نيستيم. اين كيت ابزاري قدرتمند در بررسي هاي اپيدميولوژيك نيز محسوب مي شود.

با توجه به مشكلات و عفونت هاي ناشي از اين باكتري ها، با محصول اين اختراع 4 باكتري اصلي عامل پريودنتايتيس را مي توان تشخيص داد. اهميت تشخيص اين باكتري ها با توجه به اينكه پريودنتيت شايع ترين عفونتي است كه در حال حاضر بشر با آن دست به گريبان است، عامل اصلي از دست رفتن دندان ها است و به عفونت قرن شهرت پيدا كرده است، مشخص مي شود. اين بيماري عامل تهديد كننده سلامت ارگان هاي حياتي بدن از قبيل قلب، مغز و ... به شمار مي رود. PCR روشي است كه مي توان با آن حضور ميكروارگانيسم ها را جستجو كرد. در اين اختراع با كمك چندين توالي پرايمر اختصاصي و در واكنش هاي جداگانه به طور اختصاصي جستجوي باكتري ها انجام مي شود. اين تكنيك پروسه تشخيص را ممكن، ارزان و نيز كوتاه تر مي كند. در اين اختراع بري هر يك از سكانس هاي اختصاصي باكتري ها پرايمر طراحي شد. پس از انجام واكنش تكثير، نمونه ها الكتروفورز گرديد. هر نمونه براساس طول و اندازه ناحيه تكثير يافته از يكديگر تفكيك شد. سپس ويژگي روش با استفاده از نمونه هاي كنترل منفي ارزيابي دش. نهايتا، نمونه ها جداگانه كلون گرديد و كنترل مثبت مورد نياز براي كيت توليد گرديد. كاربرد اين كيت در كلينيك هاي دندانپزشكي به شرح زير است: 1- در تأييد وضعيت پريودنتيت ( به دست آمده در معاينه فيزيكي) موثر است. 2- در ارزيابي پاسخ به درمان در مبتلايان به پريودنتيت مفيد است. 3- قبل از انجام كاشت دندان (يك عمل جراحي با هزينه بالا) در پيش بيني موفقيت آميز بودن يا غيرموفق بودن عمل موثر است.