لیست اختراعات با مالکیت
فاطمه مراديان كوچكسرائي
1 عدد
هدف از اين تحقيق تهيه GnRH نوتركيب در باكتري Escherichia coliسويه BL21به منظور توليد هورمون نوتركيب مي باشد. در اين تحقيق، توالي پپتيدي مربوط به هورمون GnRH با در نظر گرفتن پايداري و نيمه عمر بيشتر طراحي شد. سپس به توالي ژني ترجمه شد و سنتز گرديد و در وكتور بياني pET28a كلون شد. وكتور نوتركيب pET28a+/GnRH به باكتري ميزبان بياني E. coli BL21 (DE3) انتقال داده شد و صحت انتقال با كلوني PCR سنجيده شد و باند 186 جفت بازي حاصل از تكثير ژن بر روي ژل آگارز مشاهده گرديد، سپس براي بررسي بيان، باكتري نوتركيب در محيط Luria Bertani (LB) حاوي آنتي بيوتيك كانامايسين در دماي 37 درجه سانتي گراد كشت داده شد و با غلظت يك ميلي مولار IPTG القا شد و بعد از القا، باكتري در دو دما و زمان مختلف شامل 6 ساعت در دماي 37 درجه سانتي گراد و 24 ساعت در دماي 20 درجه سانتي گراد قرار گرفت تا ميزان بيان هورمون نوتركيب در دو طيف متفاوت مقايسه و سنجيده شود. وجود بيان و حضور باند مربوط به هورمون نوتركيب به كمك الكتروفورز ژل SDS-PAGE تاييد شد. باند هشت كيلودالتوني مربوط به هورمون مورد نظر بر روي ژل مشاهده شد. همچنين ميزان بيان در دماي 20 درجه سانتي گراد بيشتر از دماي 37 درجه سانتي گراد گزارش شد. خالص سازي پروتئين مورد نظر به روش كروماتوگرافي تمايلي با استفاده از ستون حاوي رزين كبالت انجام شده و باند مربوط به هورمون خالص شده بروي ژل SDS-PAGE آشكار گرديد. همچنين براي تاييد خالص سازي از روش وسترن بلاتينگ استفاده گرديد و باند مروبوط به هورمون مورد نظر با توجه به اتصال به دنباله هيستيدين در حضور انتي بادي عيله هيستيدين رديابي شد. نتايج مربوط به تعيين توالي با دستگاه اسپكتروفتومتري جرمي تاييد كننده مطابقت توالي اسيدآمينه اي هورمون خالص شده با توالي اسيدآمينه اي هورمون طراحي شده، بود. براي بررسي فعاليت بيولوژيك از موليدن آماده تكثير مصنوعي ماهي قرمز به عنوان مدل و مولدين ماهي خاوياري استرلياد استفاده شده و گروه دريافت كننده هورمون به مرحله تخم ريزي رسيده در حالي كه مولدين گروه كنترل كه سرم فيزبولوژي دريافت نمودند تخم ريزي نكردند. و نسبت تعداد مولديني كه با هورمون سنتتيك القاء شده بودند و به مرحله تخم ريزي رسيده بودند كم تر از مولديني بودند كه هورمون نوتركيب را دريافت كرده و به مرحله تخم ريزي رسيدند.
موارد یافت شده: 1