استخراج سورفاكتانت از ریه گاو و تهیه دارو از این منبع جهت استفاده در مشكلات تنفسی

خلاصه اختراع :

هدف از این مطالعه مقایسه وضعیت سلول‌های دفاعی ریه و محتوای سورفكتانتی در سنین مختلف گوساله های زنده‌ی نر و ماده و بررسی اثر استرس ناشی از ذبح و محتوای آن در بافت ریه بود تا منبع مناسب جهت تولید دارو و در ادامه فرمولاسیون داروی مذكور به دست آید. ۱۲ رأس گوساله هلشتاین و دو رگ در سه رده‌ی سنی انتخاب شدند. 12 عدد ریه راست و 12 عدد ریه چپ سالم دام ذبح شده نیز انتخاب و 150 میلی لیتر محلول نرمال سالین از طریق كاتتر وارد ریه‌ها و متعاقباً لاواژ با كمك فشار سرنگ صورت گرفت. نمونه های اخذ شده در دستگاه سانتریفوژ قرار داده شدند و محتویات رسوب به دست آمده به عنوان سورفكتانت خالص در دمای نگهداریشد.رسوبات به دست آمده جهت جداسازی دو فاز پروتئینی و لیپیدی طبق پروتكل Bligh and Dyer استخراج شدند.12 عدد بافت ریه تازه نیز انتخاب شد. برای تجزیه وتحلیل اماری داده ها بین ریه چپ و راست ازروش آماری T-Testستفاده گردید و برای تجزیه وتحلیل اماری داده ها بین گروه زنده ها و گروه 3 تایی (بافت، زنده و ریه لاواژ شده) ازروش آماری One Way ANOVA و آزمون تعقیبی توكی استفاده گردید. در همه آزمونهای آماری انجام گرفته،ارزش p-value،كمتر از 0.05 معنی دار در نظر گرفته شد. درصد ماست سل ها در جنس نر (1.25 درصد) در مقایسه با جنس ماده (صفر درصد) تفاوت معنی داری را نشان داد (04.0p= ). درصد سلولهای اپیتلیال در ریه دام ذبح شده به طور معنی داریدر مقایسه با ریه لاواژ شده دام زنده تغییر كرده بود (0.019=p ) همچنین براساس نتایج، درصد ماكروفاژ مایعات لاواژ شده ریه دام زنده در مقایسه با ریه دام ذبح شده به طور معنی داری افزایش یافته بود (0.019=p ).تراكم سلولی مایعات لاواژ شده در دام زنده (583 سلول در هر میكرولیتر) به طور معنی داری بیشتر از ریه ذبح شده (237 سلول در هر میكرولیتر) بود (0.03p=). بر اساس نتایج، علی رغم كاهش میزان فسفولیپید كل، تری گلیسیرید و لیپید كل با افزایش سن، اختلاف معنی دار آماری در سه رده سنی مشاهده نشد (05.0 p ). تفاوت معنی داری بین پروتئین كل در بافت ریه(31049 نانوگرم /میلی لیتر)، ریه لاواژ شده كل(20602نانوگرم /میلی لیتر) و گروه زنده ( 13389نانوگرم /میلی لیتر) مشاهده شد(0.05 >p). بر طبق این نتایج، فسفولیپید، كلسترول، تری گلیسیرید، لیپید و پروتئین در نمونه های ریه خرد شده در مقایسه با گروه زنده و ریه لاواژ شده بیشتر بود و این تفاوت از لحاظ آماری اختلاف معنی داری را نشان داد كه میتواند بهترین منبع جهت تهیه سورفكتانت طبیعی با منشا دامی باشد .به دلیل عدم تفاوت معنی داری بین ریه دام ذبح شده و دام زنده از نظر محتوای سورفكتانتی و به دلیل دسترسی بهتر و راحت تر به ریه دام تازه ذبح شده، به نظر میرسد ریه لاواژ شده دام تازه ذبح شده منبع راحت تر و دردسترس تری باشد. پس از انجام آنالیز های فوق بر روی سورفاكتانت حاصله از ریه گاو، از آن جهت فرمولاسیون دارو برای بیماران و دام های دچار مشكلات ریوی مخصوصا سندرم زجر تنفسی مورد استفاده قرار میگیرد. پس از اتمام فرمولاسیون دارو ،سنجش و آزمایش آن ماده فرموله شده ، آنالیز دستگاهی با كمك HPLC-MS و NMR و سپس X-ray Crystalloghraphyبرای تایید اندازه ذرات داروی فرموله شده و بررسی شرایط پایداری دارو در دما، رطوبت و pHمناسب انجام میشود.