خلاصه اختراع :

خلاصه فرایندهای طراحی ، تولید، تغلیض و تخلیص نانو ذرات T7 حامل پپتید M2e به شرح زیر می باشد: الیگونوكلئوتید كد كننده اكتودومن پروتئین M2 ویروس انفلوانزایی M2e)A با نرم افزار Gene Runner آنالیز شده و با استفاده از نرم افزار GENEius و جدول codon usage باكتری اشرشیاكلی موجود در پایگاه های اطلاعات ژنتیكی كدون اپتیمایز گردید. اولیگونوكلئوتید سنتتیك و كدون اپتیمایز شده مذكور در بین دو بازوی ژنومی باكتریوفاژ T7 كلون گردید به گونه ای كه با توالی آمینو اسیدی ژن 10B توسط یك لینكر منعطف گلایسین - گلایسین - گلایسین - سرین ادغام شود. پس از آن غربالگری ، تخلیص و تیتراسیون باكتریوفاژهای تولید شده به كمك روش Plaque Assay و براساس روش Double Agar Overlay بر روی پلیت های LB آگار انجام گرفت. نانو ذرات فاژ T7 با استفاده از آنتی بادی های مونوكلونال اختصاصی توسط روش های ELISA و Western Blot و Dot Blot و SDS-PAGE و PCR از لحاظ حضور مولكول های پپتیدM2e بر روی سطح نانو ذرات مورد آنالیز و بررسی قرار گرفته و پس از تولید انبوه در كشت باكتری اشرشیاكلی سویه BL21 مورد تخلیص و تغلیظ به روش PEG-NaCL و اولترافیلتراسیون با فیلترهای 100 كیلو دالتنی از جنس پلی اتر سولفون PES قرار گرفتند. نانو ذرات تخلیص شده به صورت زیر جلدی به موش های BALB/C ماده تزریق شده و پاسخ ایمنی با اندازه گیری میزان آنتی بادی های ضد پپتید M2e در سرم موش های ایمن شده به كمك ELISA ارزیابی شد. همچنین استخراج طحال و كشت لنفوسیت ها انجام شده و پاسخ های ایمنی سلولی اختصاصی ضد پپتید M2e با استفاده از اندازه گیری میزان اینترفرون گاما به روش ELISPOT در شرایط ex vivo مورد سنجش قرار گرفت. پس از تزریق زیر جلدی نانو ذرات موش ها با دو تحت تیپ كاملا متفاوت از ویروس انفلوانزای A یعنی PRB)H1N1 و H3N2)X47 آلوده شده و روند كاهش وزن و بقای آن ها اندازه گیری و ثبت گردید. در پایان نتایج به دست آمده به كمك نرم افزار Graphpad Prism V.S و با استفاده از تست های آماری مناسب آنالیز شدند.