كیت استخراج پلاسمید در مقیاس كم با قابلیت بالا در حذف RNA ژنومیك

خلاصه اختراع :

پلاسمیدها به عنوان یك ابزار مولكولی-ژنتیكی كاربرد بسیاری در حوزهای مختلف بیوتكنولوژی از جمله: تولید داروهای نوتركیب، ساخت واكسن ها، كیت های تشخیصی مولكولی و ... دارند. اولین گام جهت بكارگیری پلاسمیدها، تخلیص و استخراج آنها از باكتری ها می باشد. در پلاسمیدهای استخراج شده با كیت های تجاری،آلودگی به RNA و ژنوم باكتری كم و بیش دیده می شود؛ این امر در برخی از كاربردهای پایین دستی پلاسمیدها بسیار مخرب است، برای مثال در استفاده از پلاسمیدها به عنوان استاندارد در كیت های تشخیصی مولكولی (مانند كیت های تشخیصی بر مبنای qPCR، RT-qPCR)، آلودگی های مطرح شده می توانند به طور كاذب در تعیین غلظت پلاسمیدها تاثیر بگذارند و گزارش های حاصل از بار آلودگی میكروبی و یا ویروسی را منحرف كنند.همچنین این آلودگی ها می توانند كارآیی هضم آنزیمی پلاسمیدها را كاهش دهند. بطور معمول در كیت های استخراج پلاسمید، در مرحله ی اضافه نمودن بافر خنثی كننده به محلول لیزات باكتری، قطعات كروموزوم باكتری بخوبی رسوب داده می شوند اما مولكول های RNA محلول باقی می مانند. در اینجا ما برای اولین بار در روش ستونی استخراج پلاسمید، با ابداع محلول خنثی كننده ی جدید (محلول NB) حاوی نمك كلسیم كلراید، علاوه بر كروموزوم باكتری، RNA های زیادی را همراه با ژنوم باكتری رسوب داده و همچنین با اضافه نمودن اتانول به محلول لیزات باكتریایی غلظت پلاسمید استخراجی را افزایش دادیم. در پایان كیت اختراعی ما توانست نسبت به كیت تجاری، بدون تحمیل هزینه اضافی و كاملا مقرون به صرفه، با قدرت بالایی RNA ژنومی را خذف نموده و پلاسمیدهای با خلوص بسیار بالا فرآهم نماید. Plasmid Isolation Miniprep Kit With High Efficiency in Genomic RNA Removal