در حال حاضر گروهي از وكتورهاي ويروسي وجود دارند كه براي ساخت واكسن هاي نوين ويروسي مورد استفاده قرار مي گيرند. در ميان وكتورهاي ويروسي، وكتورهايي متعلق به ويروس هاي RNA دار با قطبيت منفي كاربرد گسترده تري در اين زمينه دارند. براي دستكاري ويروس ها با استفاده از تكنولوژي ژنتيك معكوس وجود وكتورهاي داراي توالي هاي پروموتري خاص و بيش از يك پايان دهنده ي رونوشت برداري (HDV ريبوزيم و T7 Terminator) از اهميت بالايي برخوردار است. به همين دليل نياز به طراحي و ساخت سيستم هايي كه بتوانند از روي ژن هاي ويروسي كلون شده در وكتورهاي نوتركيب ضروري به نظر مي رسد. هدف از اين نوآوري طراحي و ساخت سيستمي است كه بتوان با استفاده از آن خاتمه رونوشت برداري ژن هاي ويروسي نوتركيب را با صحت بالا انجام داد. به همين منظور عناصر ژنتيكي ويژه از جمله T7 Terminator و HDV ريبوزيم به بنيان وكتور اضافه شد تا با وجود MCS با توالي هاي اختصاصي براي آنزيم هاي محدودالاثر امكان Sequential Cloning براي ژن هاي ويروسي با هدف به كارگيري اين سيستم در ساخت واكسن هاي نوتركيب فراهم گردد.

بيماري نيوكاسل در پرندگان مسري است و خسارات اقتصادي مهلكي در صنعت مرغداري ايجاد مي كند. در جهان سويه‌هاي لنتوژنيك NDV از قبيل Hitcher B1 و LaSota به شكل گسترده استفاده مي‌شود. اما مطالعات نشان داده است كه واكسن همولوگ حاصل از يك ژنوتيپ خاص با همان ويروس دخيل در همه¬گيري، موجب كاهش معني‌دار اين بيماري مي‌گردد. براي ساخت واكسن هاي جديد برمبناي ژنوتيپ هاي رايج از روش ژنتيك معكوس استفاده مي شود. در اين روش cDNA كامل ژنوم ويروسي كلون شده و به همراه سه وكتور كمكي P، L و NP ويروس نوتركيب در سلول¬هاي ميزبان بازيابي مي شود. در اين اختراع، از روش BioBrick به منظور ساخت سازه هاي ژني مورد نياز در ژنتيك معكوس استفاده شد كه در آن با استفاده از آنزيم هاي برشي SalI، AsisI و PacI قطعات ژني مختلف ژنوم NDV برش داده شده و با استراتژي جديد Asis-Sal-Pac-BioBrick ژنوم كامل NDV با رعايت اصل "rule of six" ساخته شد. موتاسيون مستقيم ناحيه برشي ژن F از موتيف 112RRQKRF117 به 112GRQGRI117 جهت تخفيف حدت ويروس تغيير يافت كه تمامي مراحل ساخت ژنوم كامل ويروس و وكتورهاي كمكي با تعيين توالي مورد تاييد شد.

كولي باسيلوز طيور يك بيماري شايع، سيستميك و با پراكنش جهاني است كه ضررهاي اقتصادي فراواني به صنعت طيور وارد كرده و بيشترين فراواني را در ابتلا و مرگ‌ومير دارد. اين عفونت توسط سويه¬هاي پاتوژنيك باكتري اشرشيا كلي (APEC) ايجاد مي¬گردد. استراتژي‌هاي درماني شامل كنترل و نظارت بر روي عوامل زمينه‌ساز عفونت، تجويز آنتي‌بيوتيك و استفاده از واكسن هاي ساخته شده موجود عليه اين بيماري مي¬باشد. متأسفانه به علت مصرف بي‌رويه آنتي‌بيوتيك، سويه‌هاي مقاوم به يك يا چند آنتي‌بيوتيك‌ ايجاد شده¬اند. واكسن¬هاي موجود شامل واكسن كشته، واكسن تخفيف حدت يافته و واكسن نوتركيب است كه هر كدام داراي معايبي بوده و هيچ‌كدام نمي‌توانند مصونيت كامل در برابر اين بيماري ايجاد نمايند. هدف اين اختراع معرفي نوعي واكسن فاقد اسيدنوكلئيك با استفاده از فناوري شبح باكتريايي (BGs) عليه باكتري APEC سويه O78K80 مي¬باشد كه در فرمانتور نيمه صنعتي توليد شده است. واكسن كانديد O78K80 BGs توان تحريك سيستم ايمني ميزبان با افزايش پاسخ¬هاي ايمني ذاتي و اكتسابي و كاهش ميزان ضايعات كالبدگشايي در جوجه¬هاي ميزبان را دارد. بنابراين مي¬توان ادعا كرد فناوري شبح باكتريايي امكان توليد واكسن¬هاي -پلي والان بر عليه سويه¬هاي در گردش و شايع APEC در منطقه، ايران و ساير كشورها را فراهم مي¬نمايد.

خلاصه اي از توصيف اختراع: در اين تحقيق داربست مشتق شده از ماتريكس خارج سلولي ECM غضروف مفصلي به عنوان داربست بعدي جهت مطالعات مهندسي بافت تهيه گرديد. براي اين كار ابتدا قطعاتي از غضروف مفصلي اپي فيز استخوان ران گاو تهيه شده و سپس با روش فريز-ذوب سريع و استفاده از شوينده سديم دودسيل سولفات SdS. بافت حاصل سلول زدايي گرديد. بررسي هاي بافت شناسي با هماتوكسيلين _ ائوزين، رنگ فلورسنت DAPI و نيز تصاوير ميكروسكوپ الكتروني اسكنينگ وجود ماتريكس فاقد سلول را نشان داد. همچنين رنگ آميزي هاي اختصامي تركيبات ECM غضروفي مانند آبي تولوئيدين، سافرانين 0 و بيكروسيروس رد حفظ تركيبات ECM را تاييد مي كرد. داربست مشتق شده از ECM غضروف مفصلي به علت تهيه از منبع طبيعي، داشتن معماري و خلل و فرج طبيعي و نيز حذف اثر آنتي ژنيك سلول هاي بافت مي تواند كاربرد وسيعي در مطالعات كشت سلولي و مهندسي بافت داشته باشد.

در اين تحقيق داربست مشتق شده از ماتريكس خارج سلولي (ECM) استخوان اسفنجي به عنوان داربست سه بعدي در مهندسي بافت، تهيه گرديد. براي اين كار ابتدا قطعاتي از استخوان اسفنجي اپي فيز استخوان ران گاو تهيه شده و سپس با روش هاي فيزيكي و شيميايي از جمله آب جوش، فريز - ذوب سريع و استفاده از شوينده سديم دودسيل سولفات ( SDS)، بافت حاصل سلول زدايي گرديد. مطالعات ماكروسكوپي نشان از خلل و فرج فراوان در بافت استخوان اسفنجي بعد از فرايند سلول زدايي مي دهد، همچنين بررسي هاي بافت شناسي با هماتوكسيلين - ائوزين و رنگ فلورسنت DAPI وجود ماتريكس فاقد سلول را نشان داد، همچنين رنگ هاي اختصاصي تركيبات ECM استخوان اسفنجي مانند پيكروفوشين و پيكروسيروس رد حفظ تركيبات ماتريكس بافت، بخصوص كلاژن را نشان داد. اين داربست به علت تهيه از منبع طبيعي، داشتن معماري و خلل و فرج طبيعي و نيز حذف اثر آنتي ژنيك سلول هاي بافت مي تواند كاربرد وسيعي در مطالعات كشت سلولي بعنوان محيطي سه بعدي و كاربردهاي مهندسي بافت داشته باشد.