امروزه، توسعه مهندسي ژنتيك امكان توليد پروتئين هاي نوتركيب جهت توليد داروها، واكسن هاي مختلف و همچنين استفاده از ناقل هاي غذايي براي مصارف درماني را فراهم كرده است. اگر چه ميزبان هاي مختلفي براي بيان پروتئين هاي نوتركيب مورد استفاده قرار مي گيرند اما هيچكدام امكان استفاده به صورت خوراكي و در قالب مدل غذايي را دارا نمي باشند. در اين پژوهش براي اولين بار ژن كد كننده پروتئين Amar.2 وارد وكتور گريد غذايي pNZ7025 شد و سپس طي فرايند الكتروپوريشتن، pNZ7025-Amar.2 وارد باكتري پروبيوتيك و داراي گريد غذايي Lactococcus lactis NZ1330 گرديد. برخلاف ساير سازه هايي كه ثبت اختراع شده و مبناي انتخاب باكتري كلون شده بر روي محيط كشت استفاده از آنتي بيوتيك مي باشد، براي اين باكتري و وكتور، مبناي انتخاب كلني ترانسفرم شده استفاده از آمينواسيد آلانين است. جهت اصلاح ساختار وكتور براي بيان پروتئين، 8 نوكلئوتيد كه فاصله ميان جايگاه اتصال ريبوزوم و كدون شروع بود با تكنيك Site-Directed Mutagenesis حذف و وكتور اصلاح شده مجدد وارد باكتري Lactococcus lactis NZ1330 شد. محيط كشت M17 به همراه گلوكز 1.5 درصد براي رشد باكتري نوتركيب استفاده شد. همچنين ديگر مزيت سازه بياني و ميزبان مورد استفاده قرار گرفته در اين اختراع اين است كه بر خلاف ساير سازه هاي موجود براي شروع بيان پروتئين نيازي به القاگر ندارد كه اين ويژگي در راستاي گريد غذايي بودن اين اختراع مي باشد. بيان پروتئين با استفاده از روش وسترن بلاتينگ و آنتي بادي Antipoly-histidine peroxidase مورد آناليز قرار گرفت كه بيشترين ميزان بيان در روز پنجم مشاهده شد. اميد است اختراع حاضر بتواند الگويي را فراهم اورد كه در ساير موارد مشابهي كه نياز به توليد پروتئين نوتركيب در شرايط in situ وجود دارد، مورد استفاده قرار گيرد.

دانه هاي بارهنگ كبير به طور دستي و به دقت جهت حذف تمام ذرات خارجي، سنگ ريزه و ساير مواد زائد تميز شدند. جهت حذف گرد و غبار چسپيده به دانه هاي بارهنگ كبير شست و شوي سطحي با آب سرد انجام گرديد. به منظور جداسازي موسيلاژ دانه بارهنگ كبير از دانه كامل به نسبت 60 به 1 آن آب مقطر اضافه شد و به مدت 90 دقيقه در دماي 75 درجه سانتي گراد و 7 pH= مخلوط آب و دانه توسط همزن پارويي با دور 1100 دور بر دقيقه عمل همزدن انجام گرديد. جداسازي موسيلاژ از دانه هاي متورم با عبور دانه ها از اكستراكتور مجهز به صفحه چرخنده (استخراج كننده آزمايشگاهي، شركت پارس خزر، ايران) جدا و پس از عبور از صافي جهت جداسازي ناخالصي ها، در دماي 45 درجه سانتي گراد داخل آون خشك گرديد. موسيلاژ به دست آمده آسياب شد و پس از بسته بندي در شرايط خشك و خنك نگهداري شد. اسانس هاي شويد و ترخون با روش تقطير با آب و به وسيله كلونجر اسانس گيري شدند. برهمكنش اسانس هاي شويد و ترخون به روش بازدارنده افتراقي مورد ارزيابي قرار گرفت. در نهايت پوشش ضد ميكروبي بر پايه موسيلاژ بارهنگ كبير (پنج گرم از موسيلاژ استخراج شده و 75/1 گرم توئين 80 درصد) با آب مقطراستريل به حجم 100 ميلي ليتر رسانيده شد و توسط همزن مغناطيسي حرارت داده شد و مخلوط گرديد، در انتها غلظت هاي 5/0، 1 و 5/1 درصد اسانس هاي شويد و ترخون (تركيبي) به محلول موسيلاژ اضافه شد و نمونه هاي گوشت گاو (اسلايس شده) به روش غوطه وري پوشش دهي شدند. آزمون هاي ميكروبي (شمارش كل باكتري هاي زنده، سرمادوست¬ها، كپك و مخمر، اشرشيا كلي و استافيلوكوكوس اورئوس)، آزمون هاي شيميايي (pH، عدد پراكسيد و تيوباربيوتيك اسيد) و ارزيابي حسي (رنگ، بو و پذيرش كلي) روي نمونه هاي گوشت گاو نگهداري شده در دماي يخچال (4 درجه سانتي گراد) در روزهاي (صفر، 3، 6، 9، 12، 15 و 18) انجام پذيرفت. براساس آناليز هاي ميكروبي (تعداد كل باكتري هاي زنده) زمان ماندگاري نمونه پوشش داده شده با موسيلاژ بارهنگ كبير (فاقد اسانس) و نمونه¬هاي حاوي غلظت هاي 5/0، 1 و 5/1 درصد اسانس هاي شويد و ترخون نسبت به نمونه كنترل افزايش يافت.