رگ‌زايي يك فرآيند زيستي مهم در بسياري از شرايط فيزيولوژيك و پاتولوژيك است. VEGFها خانواده‌اي از تنظيم كننده‌هاي كليدي در رگ‌زايي بوده كه مهم‌ترين و شناخته شده‌ترين عضو اين خانواده VEGF-A مي‌باشد. در حال حاضر VEGF ها به‌طور گسترده‌اي در جهان توسط تكنيك‌هاي مهندسي ژنتيك به‌صورت نوتركيب توليد مي¬شوند و در تحقيقات مختلف رگ‌زايي، سلول‌هاي بنيادي، پزشكي ترميمي و مهندسي كشت بافت مورد مصرف قرار مي¬گيرند. VEGF-A به صورت واريانت‌هاي مختلفي وجود داشته كه حاوي اگزون‌هاي متفاوت، ويژگي‌هاي برجسته متمايز و الگوهاي بياني اختصاصي مي‌باشند. در بين تمام ايزوفرم‌هاي VEGF-A، فاكتور جديد 111VEGF با ويژگي رگ‌زايي قوي و پايداري بسيار بالا از اهميت ويژه‌اي در تحقيقات بيولوژي مولكولي برخوردار بوده و به عنوان يك فاكتور درماني پيشنهاد مي‌شود. رگ‌زايي ناقص و ايسكمي يكي از مشكلات مهم در پزشكي و در بسياري از اختلالات شامل بيماري هاي قلبي – عروقي و جراحت‌ها مي‌باشد. در اين شرايط پاتولوژيك، محيط پروتئوليتيك و مخصوصاً سرين پروتئازهايي مانند پلاسمين منجر به تجزيه‌ي VEGF-A و رگ‌زايي ناقص مي‌شوند. ويژگي رگ‌زايي قوي در واريانت 111VEGF و مقاومت آن نسبت به فرآيند پروتئوليز، آن را به كانديد جالب و جذاب براي كاربردهاي درماني در بيماري‌هاي ايسكميك تبديل نموده است. هدف از پروژهي حاضر، سنتز و كلونينگ cDNAي فاكتور رشد 111VEGF به صورت نوتركيب همراه با افزودن توالي اينتروني (براي اولين بار در جهان) به منظور بالا بردن ميزان بيان و ترجمه‌ي اين ايزوفرم مي‌باشد. در اين راستا، طي واكنش‌هاي PCR مجزا قطعات كد كننده اگزون‌هاي 4-1 و اينترون 5-4 تكثير شده و با قرار دادن توالي كد كننده جايگاه شناسايي يكي از آنزيم‌هاي نوع IIs به نام Eco31I در پرايمرهاي مورد نظر، اين دو قطعه‌ي به يكديگر متصل شده و در وكتور pBud.CE4.1 كلون گرديدند. در ادامه، پلاسميد نوتركيب pBud-VEGF111 درون باكتري E.coli Top10 ترانسفورم شده و پس از تأييد فرآيند كلونينگ درون دو لاين سلولي CHO dhfr- و HEK 293 ترانسفكت گرديد. سپس، بيان ايزوفرم 111VEGF توسط تكنيك Real time PCR و در دو لاين سلولي مورد استفاده بررسي شد. در نهايت توليد پروتئين 111VEGF از طريق دو تست دات بلات و الايزا به طور كيفي مورد مطالعه قرار گرفت. در مجموع، با توجه به روند رو به رشد تحقيقات حيطه پزشكي و زيستي در كشور، نياز به نمونه داخلي فاكتورهاي نوتركيب بيش از پيش احساس مي‌گردد. به علاوه، با توجه به گسترش آمار ابتلا به بيماري‌هاي قلبي-عروقي در سراسر جهان و ايران، توليد داروها و فاكتورهاي رشد نوتركيب در راستاي درمان و تحقيقات مورد نياز براي اين بيماري از اهميت فوق العاده‌اي برخوردار است. عملي نمودن پروژه حاضر گامي نو در راستاي پاسخ به نياز كشور در بومي‌سازي توليد انواع فاكتورهاي رشد و داروهاي نوتركيب مورد نياز در تحقيقات و پژوهش‌هاي زيست پزشكي است.

VEGF-A مهم ترين و كليدي ترين فاكتور رگ‌زايي بوده و تنها فاكتوري است كه در تمام سيكل زندگي يك تومور، حضور و عملكرد آن لازم و ضروري است. بيان اين فاكتور رشد در بافت توموري به شدت افزايش يافته و رگ‌زايي را القا مي‌نمايد. مطالعات گسترده‌اي كه بر روي مكانيسم‌هاي كنترل كننده پيچيده بيان VEGF-A انجام گرفته، نويد بخش درمان‌هاي موثرتر براي انواع سرطا‌ن‌ها مي‌باشد. هدف اصلي تمامي اين روش‌ها، كاهش بيان VEGF-A در توده توموري و در نتيجه كاهش رگ‌زايي بوده كه از اين طريق رشد و متاستاز تومور مهار مي شود. يكي از جديدترين روش‌هاي درماني ضد رگ‌زايي، استفاده از انواع واريانت‌هاي ضد رگ‌زايي(VEGFxxxb) است. در بين تمام ايزوفرم‌هاي VEGF-A، فاكتور جديد VEGF-111bبا ويژگي ضد رگ‌زايي و پايداري بسيار بالا از اهميت ويژه‌اي در تحقيقات سرطان برخوردار بوده و به عنوان يك فاكتور درماني پيشنهاد مي‌شود. افزايش رگ‌زايي يكي از مشكلات مهم در پزشكي و در بسياري از اختلالات شامل انواع سرطان‌ها و بيماري‌هاي شبكيه مي‌باشد. ويژگي ضد رگ‌زايي در واريانت 111VEGF و مقاومت آن نسبت به فرآيند پروتئوليز، آن را به كانديد جالب و جذاب براي كاربردهاي درماني ضد رگ‌زايي در سرطان تبديل نموده است. در پروژه حاضر، فاكتور VEGF-111b با استفاده از تكنيك‌هاي مهندسي ژنتيك براي اولين بار در ايران و جهان به صورت نوتركيب دو لاين سلولي CHO dhfr- و HEK 293 توليد گرديد. با توجه به گسترش آمار ابتلا به سرطان در سراسر جهان و ايران، توليد داروها و فاكتورهاي رشد نوتركيب در راستاي درمان و تحقيقات مورد نياز براي اين بيماري از اهميت فوق العاده‌اي برخوردار است. عملي نمودن پروژه حاضر گامي نو در راستاي پاسخ به نياز كشور در بومي‌سازي درمان‌هاي ضد رگ‌زايي سرطان مي‌باشد.