توليد آنزيم نوتركيب فيتازمقاوم به حرارت باكاربرد صنعتي

خلاصه رفع نقص شده باكتري اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك (ETEC) يكي از عوامل اوليه اسهال در گوساله¬هاي تازه متولد شده و در برخي از گونه¬ها به عنوان مثال گوسفند و خوك مي¬باشد. هدف از اين اختراع، توليد آنتي¬بادي اختصاصي Y ضد آنتي¬ژن¬ FanC مسبب اسهال ناشي از اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك و معرفي آن به عنوان مكمل آغوز در جيره گوساله¬ها در نخستين روزهاي پس از تولد مي¬باشد. در اين پژوهش، توالي آنتي¬ژن FanC(K99) از بانك جهاني ژن بدست آمد و يك جفت آغازگر اختصاصي به منظور تكثير اين توالي نوكلئوتيدي با استفاده از نرم¬افزار Primer primer 5 طراحي گرديد. ژنوم استخراج شده از اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك به عنوان الگو در واكنش ژنجيره¬اي پليمراز مورد استفاده قرار گرفت. در پلاسميدpTZ57R/T كلون و در pET32a(+) ساب كلون شد. ناقل بياني نوتركيب به ميزبان بيان اشرشياكلي BL21CodonPlus(DE3) منتقل گرديد و پس از تخليص پروتئين نوتركيب FanC، جهت توليد آنتي¬بادي اختصاصي Y ضد اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك به مرغ¬هاي تخم¬گذار تزريق شد. تخم مرغ‌ها به مدت 8 هفته جمع آوري شدند و تخليص IgY انجام شد. IgY توليد شده در زرده تخم مرغ آنها با استفاده از روش SDS-PAGE و دات¬بلات بررسي و تأئيد شد. توان آنتي¬بادي اختصاصي در شناسايي پروتئين نوتركيب توليد شده با روش الايزا مورد بررسي قرار گرفت. كلونيگ آنتي¬ژن FanC با روش¬هاي كلوني PCR، هضم¬آنزيمي و تعيين توالي تأييد شد. توالي آنتي¬ژن FanC(K99) اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك سويه ايراني در بانك جهاني ژن با شماره دسترسي KP054295 ثبت شد. غلظت پروتئين نوتركيب FanC، 3/1 ميلي¬گرم بر ميلي¬ليتر بود. نتايج صحت آنتي¬بادي اختصاصي Y ضد اشرشياكلي انتروتكسيژنيك توليد شده را تأييد كرد. اين پروتئين توليدي مي¬تواند به عنوان مكملي همراه با آغوز در پيشگيري از سندروم اسهال ناشي از اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك در نخستين روزهاي اوليه پس از تولد فارم¬هاي دامپروري كشور مورد استفاده قرار گيرد.

امروزه ايمونوتراپي يك روش درماني اميدواركننده در درمان انواعي از سرطان¬هاست كه برخلاف روش¬هاي قبلي از اختصاصيت بالايي برخوردار است. آنتي¬ژن EGFR خانواده بزرگي از گيرنده¬هاي تيروزين¬كيناز مي¬باشد كه در چند سرطان از جمله: كولوركتال، پروستات، پانكراس، تخمدان، سينه، ريه، سر¬گردن و مري بيش¬بيان دارد. اگرچه آنتي¬بادي¬هاي تجاري براي هدف قرار دادن اين آنتي‌ژن توليد شده¬اند اما اندازه بزرگ اين آنتي¬بادي¬ها منجر به كاهش نفوذ به بافت توموري و بازده درمان سرطان مي¬گردد. از اين¬رو، در اين محصول با مهندسي و طراحي scFv آنتي¬بادي متصل به ريبونوكلئاز رانپيرناز، توليد ايمنوريبونئوكلئازي ويژه برعليه آنتي¬ژن EGFR صورت پذيرفت. اين محصول قادر است كه سلول هاي با بيش بيان EGFR را شناسايي و سبب آپوپتوزيس در آنها شود. همچنين با توجه به نحوه طراحي سازه، توليد و خالص سازي اين ايمنوريبونئوكلئاز بسيار مقرون به صرفه و آسان صورت مي پذيرد.

اين اختراع با هدف ايجاد ايمني غيرفعال خوراكي در برابر باكتري هليكوباكتر پيلوري كه شيوع بسيار وسيعي در جهان داشته و عامل اصلي زخم و سرطان معده در انسان است، صورت پذيرفت. بدين منظور، سلول هاي باكتري هليكوباكتر پيلوري با استفاده از فرمالدهيد غيرفعال و پس از تركيب با ادجوانت فعال و غيرفعال فروند به 4 نقطه از سينه مرغ نژاد لگهورن سفيد تزريق زيرجلدي شد. استخراج آنتي بادي IgY با استفاده از پلي اتيلين گلايكول و كيفيت و غلظت آن با استفاده از روش هاي SDS-PAGE و برادفورد مورد بررسي قرار گرفت. از زرده تخم مرغ هاي حاوي IgY به منظور توليد بستني تخم مرغي استفاده و محصول در مقايسه با بستني وانيلي مورد ارزيابي حسي قرار گرفت. از تست الايزا غيرمستقيم به منظور بررسي فعاليت IgY استخراجي، همچنين فعاليت IgY در طي سه ماه پس از توليد استفاده شد. آناليز فعاليت IgY با روش الايزا نشان داد كه بيشترين ميزان اين آنتي بادي در هفته دوم داشته و بعد از 3 ماه نگهداري بستني تخم مرغي در دماي 94-18 درصد از فعاليت آنتي بادي حفظ شده است.

بسياري از افراد با توجه به شغل و يا حيطه ورزشي كه در آن فعاليت مي¬كنند ناچارند تا در فصول سرد سال در مناطق كوهستاني و سرد سير بدون وسايل گرمايشي، ساعت¬ها در محيط بيرون قرار بگيرند. در هنگام سرماي شديد، استفاده از چندين لايه لباس، روشن كردن آتش، مصرف نوشيدني¬هاي گرم و... نمي¬تواند گرماي مورد نياز بدن را تأمين نمايد. استفاده از گرم¬كن و يا بخاري¬هاي كوچك و جيبي كه به راحتي قابل حمل هستند، روش مناسبي براي حل اين مشكل است. اجزاي اين سيستم عبارت است از: روكش چرم، پيچ¬هاي اتصال، عايق حرارتي، ميكروكنترلر برنامه¬نويسي شده، درگاه Micro USB، المنت¬هاي حرارتي، منافذ انتقال حرارت، ال اي دي¬هاي نشان¬گر شدت دما، كليد خاموش و تنظيم دما، واشر سيليكوني نسوز، بازخورد ويبره براي وضعيت دما. با استفاده كردن از اين سيستم توسط يگان¬هاي ويژه و سربازان در عمليات¬ها، هلال احمر براي افرادي كه دچار يخ¬زدگي شده¬اند، ورزشكاراني مانند دوچرخه¬سواران و كوهنوردان، گرمادرماني و در منازل به¬عنوان يك وسيله ضروري در مواقع زلزله و بهمن، ضررهاي جبران ناپذيري كه ممكن است به دليل سرماي شديد به اين افراد وارد شود را به¬طور كامل رفع خواهيم كرد.

امروزه، مصرف كنندگان به دنبال غذاهاي هستند كه باعث سلامتي شده و مي تواند خطر ابتلا به بيماري‌ها را كاهش دهد. تخم مرغ به عنوان منبع بزرگي از ايمونوگلوبين Y است كه نقش بسيار مهمي در ايمني غيرفعال دارد. از اين رو، اين اختراع با هدف ايجاد ايمني غيرفعال خوراكي در برابر باكتري هليكوباكتر پيلوري كه شيوع بسيار وسيعي در جهان داشته و عامل اصلي زخم و سرطان معده است، صورت پذيرفت. بدين منظور، سلول هاي باكتري هليكوباكتر پيلوري با استفاده از فرمالدهيد غيرفعال و پس از تركيب با ادجوانت فعال و غيرفعال فروند به 4 نقطه از سينه مرغ نژاد لگهورن سفيد تزريق زيرجلدي شد. استخراج آنتي بادي IgY با استفاده از پلي اتيلين گلايكول و كيفيت و غلظت آن با استفاده از روش هاي SDS-PAGE و برادفورد مورد بررسي قرار گرفت. از زرده تخم مرغ هاي حاوي IgY به منظور توليد بستني تخم مرغي استفاده و محصول در مقايسه با بستني وانيلي مورد ارزيابي حسي قرار گرفت. از تست الايزا غيرمستقيم به منظور بررسي فعاليت IgY استخراجي، همچنين فعاليت IgY در طي سه ماه پس از توليد استفاده شد. آناليز فعاليت IgY با روش الايزا نشان داد كه بيشترين ميزان اين آنتي بادي در هفته دوم داشته و بعد از 3 ماه نگهداري بستني تخم مرغي در دماي 94-18 درصد از فعاليت آنتي بادي حفظ شده است. بررسي ارزيابي حسي نشان دهنده عدم تفاوت معني دار بين بستني وانيلي و تخم مرغي و بازارپسندي مناسب بستني تخم مرغي است. بنابراين، بستني تخم مرغي حاوي IgY توليد شده در اين اختراع، مي تواند كانديد مناسبي براي پيشگيري و درمان جمعيت هاي درگير با باكتري هليكوباكتر پيلوري باشد.

توليد كيت شناسايي جهش incs 5382 ژن brca موثر در سرطان پستان با استفاده از روش arms-pcr سرطان پستان شايع ترين سرطان در بين زنان ايراني است مطالعات مداوم ژنتيكي در خانواده هاي دچار سرطان پستان با تظاهر زود هنگام، منجر به كشف ژن brca شده است تحقيقات گسترده بر روي اسنپ هاي مورد مطالعه در جمعيت هاي مبتلا به سرطان پستان و تخمدان نشان داده كه جهش insc 5382 ژنbrca با ثبت ژني rs77944974 داراي بيشترين فراواني در بين جمعيت هاي مختلف جهان دارد. ابتدا با استفاده از كيت استخراج dna از خون dna كل ژنومي استخراج مي گردد سپس پرايمرهاي بيروني طراحي شده و با استفاده از واكنش حرارتي pcr تكثير مي گردند سپس براي تشخيص جهش، پرايمرهاي داخلي به گونه اي طراحي مي گردد كه در انتهاي 3 مي بايستي داراي جهش مورد نظر باشد سپس با تغيير برنامه حرارتي واكنش arms-pcr و ايجاد يك دماي مطلوب اين پرايمرها بهينه شده و سپس براي تشخيص اين جهش بر روي الكتروفورز در كوتاهترين زمان ممكن استفاده مي شود. با كوتاهترين زمان و كمترين هزينه مي توان اين جهش را شناسايي كرداز طرفي دستگاه ماموگرافي در بيمارستان ها و آزمايشگاه هاي تخشيص طبي فقط قادر به شناسايي افراد مبتلا به سرطان پستاني مي باشد كه داراي توده وخيم قابل مشاهده مي باشد و در افرادي كه در يك خانواده به صورت ژنتيكي داراي اين بيماري و مستعد هستند قابل تشخيص نمي باشند اما با استفاده از اين كيت حتي مي توان از بروز زود هنگام سرطان پستان بدون دستگاه ماموگرافي در يك خانواده مستعد جلوگيري به عمل آورد. از اين روش در آزمايشگاه هاي مرجع و بيمارستان ها و آزمايشگاه هاي ژنتيكي تشخيص سرطان پستان در سطح گسترده توصيه مي گردد.

توليد كيت شناسايي جهش 185delAG ژن BRCA موثر در سرطان پستان با استفاده از روش ARMS-PCR سرطان پستان شايع ترين سرطان در بين زنان ايراني است مطالعات مداوم ژنتيكي در خانواده هاي دچار سرطان پستان با تظاهر زود هنگام منجر به كشف ژن BRCA شده است تحقيقات گسترده بر روي اسنپ هاي مورد مطالعه در جمعيت هاي مبتلا به سرطان پستان و تخمدان نشان داده كه جهش 5382insC ژن BRCA با ثبت ژني rs77944974 داراي بيشترين فراواني در بين جمعيت هاي مختلف جهان دارد. ابتدا با استفاده از كيت استخراج DNA از خون DNA كل ژنومي استخراج مي گگردد سپس پرايمرهاي بيروني طراحي شده و با استفاده از واكنش حرارتي PCR تكثير مي گردند سپس براي تشخيص جهش پرايمرهاي داخلي به گونه اي طراحي مي گردد كه در انتهاي 3 مي بايستي داراي جهت مورد نظر باشند سپس با تغيير برنامه حرارتي واكنش ARMS-PCR و ايجاد يك دماي مطلوب اين پرايمرها بهينه شده و سپس براي تشخيص اين جهش بر رو ژل الكتروفورز در كوتاهترين زمان ممكن استفاده مي شود. با كوتاهترين زمان و كمترين هزينه مي توان اين جهش را شناسايي كرد از طرفي دستگاه ماموگرافي در بيمارستان ها و آزمايشگاه هاي تشخيص طبي فقز قادر به شناسايي افراد مبتلا به سرطان پستاني مي باشد كه داراي توده وخيم قابل مشاهده باشد و در افرادي كه در يك خانواده به صورت ژنتيكي داراي اين بيماري و مستعد هستند قابل تشخيص نمي باشد اما با استفاده از اين كيت حتي مي توان از بروز زود هنگام سرطان پستان بدون دستگاه ماموگرافي در يك خ0انواده مستعد جلوگيري به عمل آورد. از روش در آزمايشگاههاي مرجع و بيمارستان ها و آزمايشگاههاي ژنتيكي تشخيص سرطان پستان در سطح گسترده توصيه مي گردد.

خودروباسوختي ازهوا