اختراع حاضر باعنوان " طراحي 6 پرايمر جهت تشخيص RNA ويروس هاري(Rabies virus)توسط تكنيك تك دمايي RT-LAMP در سويه هاي در گردش در ايران " ، شامل 6 پرايمر مي باشد كه در جهت تشخيص RNA ويروس هاري طي تكنيك تك دمايي RT-LAMP به كار مي رود. در مطالعه اي كه در ژاپن براي تشخيص ويروس هاري از طريق اين تكنيك صورت گرفت پرايمر هايي طراحي شدند كه در عمل قادر به اتصال به توالي هدف خود نبودند به همين دليل طي استفاده از آن ها نتيجه مطلوبي حاصل نشد و برآن شديم تا پرايمر هاي كارآمدي را طراحي نماييم. طراحي پرايمر ها از طريق نرم افزار LAMP Primer designing soft ware primer explorer V3 بر اساس توالي نوكلئوتيدي ويروس هاري با شماره توالي NC_001542.1 در سايت NCBI انجام گرفت. براي طراحي پرايمرهاي LAMP بايد وارد سايت Eiken شده و به صورت برخط، طراحي پرايمر انجام مي گيرد. در اين پروژه، از نسخه V5 براي طراحي پرايمر استفاده گرديد. در آغاز طراحي پرايمرها، نرم افزار به صورت اتوماتيك درصد GC را محاسبه مي كند و همان طور كه اشاره شد سكانس هدف بايد بين 2000-500 جفت باز باشد و دقت شود كه از اين حدود خارج نشود. در نهايت 6 پرايمر شامل 2 پرايمر خارجي، 2 پرايمر لوپ و 2 پرايمر داخلي براساس ژن N طراحي شدند كه قادر بودند با اختصاصيت بالايي به توالي هدف خود متصل شوند.

فنيل كتونوري (PKU) رايج ترين اختلال ژنتيكي مغلوب آتوزومي است كه در نتيجه نقص آنزيم فنيل آلانين هيدروكسيلاز (PAH) به دليل نقص در ژن كد كننده آن ايجاد مي شود. بارزترين عارضه ي PKU در صورت عدم پيگيري و درمان، عقب ماندگي ذهني شديد مي باشد. بنابر اين تشخيص زود هنگام و درمان تغذيه اي با محدود سازي فنيل آلانين در رژيم غذايي و كنترل غلظت در خون مهمترين اقدام در پيشگيري از اين نوع عقب ماندگي ذهني مي باشد. بيش از ۵۰۰ جهش مختلف در ژن PAH شناخته شده است.امروزه جهت تشخيص جهش هاي ژن PAH در افراد مبتلا به فنيل كتونوري در كشور، ابتدا اگزون هاي خاص با شيوع بالاي جهش و در صورت عدم وجود جهش در آنها، كل ژن توالي يابي (DNA Sequencing) مي شود كه به علت تنوع و پراكندگي جهش ها امري زمانبر و پر هزينه است و نياز به طراحي روشي كه بتواند چندين جهش را به طور همزمان در زماني كوتاه بررسي نمايد كاملا احساس مي شود. ميني سكونسينگ روشي كارا و حساس٬دقيق و سريع براي تعيين جهش هاي شناخته شده يك يا چندين ژن است كه قابليت انجام به صورت مولتي پلكس را دارد. در اين روش براي هر جهش يك پرايمر طراحي مي شود كه اين پرايمر ها از نظر طول با يكديگر متفاوتند. ′۳ پرايمر ها دقيقا مجاور نوكلئوتيد داراي جهش است و با اتصال ddNTP نشاندار مكمل توالي مورد نظر(بر حسب ژنوتيپ)، خاتمه زنجيره صورت مي پذيرد و در نهايت مجموعه اي از قطعات با طول متفاوت و با رنگ هاي فلورسنت متفاوت خواهيم داشت. اين قطعات توسط روش Fragment analysis بررسي شده و ژنوتايپينگ نمونه ها بر اين اساس صورت مي پذيرد.

در اين اختراع پايداري اريتروپويتين به عنوان داروي پروتئيني بيان شده در سلول حيواني در حضور 16 ماده شيميايي پايداري كننده اريتروپويتين، به عنوان چپرون شيميايي مختلف بررسي شد. در اين رابطه تجمع پروتئين ايجاد شده با حرارت با روش كدورت سنجي، DLS و روشهاي فيزيكي و شيميايي ديگر بررسي شد. روش كدورت سنجي در پليت 96 خانه به عنوان روشي ارزان و ساده براي غربالگري مواد شيميايي در پايداري پروتئين به شكل وسيع با روش تسهيل شده حرارتي، بكار رفت. اثر 16 ماده شيميايي سيستئين، دكستران، مانيتول، بتائين، ترهالوز، تورين،لينولئيك اسيد، بتاسيكلودكسترين، سولفات مس و اسپرميدين، مالتوز، بتاآلانين، مالتودكسترين، ميواينوزيتول، سوكروز و لينولئيك اسيد كونژوگه شده در تجمع اريتروپويتين ايجاد شده با حرارت، بررسي شد. سپس مواد فوق به عنوان پايدار كننده اختصاصي در آزمايشات بعدي از جمله طيف سنجي فلورسنس بكار رفتند. در مرحله بعد اثر 16 چپرون شيميايي بر رشد سلول CHO نوتركيب و توليد اختصاصي اريتروپويتين (qEPO) و تجمع داخل و خارج سلولي آن بررسي شد. همچنين در اين مطالعه اثر چپرونهاي مولكولي و افزايش سايز شبكه اندوپلاسمي ايجاد شده توسط چپرونهاي شيميايي بر بيان اريتروپويتين در سلول CHO بررسي شد. در اين مرحله هر 16 ماده قبلي مورد استفاده قرار گرفتند و اثر آنها بر ترشح اريتروپويتين در سلول CHO بررسي شد. همچنين در مجاورت سلول با مواد شيميايي پاسخ پروتئين فولد نشده (UPR) را با بررسي بيان اريتروپويتين و چپرونهاي اندوژن مقيم شبكه اندوپلاسمي و گسترش شبكه اندوپلاسمي مطالعه شد. گسترش شبكه اندوپلاسمي با استفاده از نشاندار كردن اختصاصي آن با استفاده از گلايبن كلامايد كونژوگه شده با FITC و بيان چپرونهاي مولكولي با استفاده از real-time polymerase chain reaction بررسي شد. از طرف ديگر گسترش شبكه اندوپلاسمي در مجاورت بتاآلانين، بتاسيكلودكسترين و تورين باعث افزايش توليد و ترشح اريتروپويتين شد. افزايش بيان ژن اريتروپويتين بالايي در مجاورت لينولئيك اسيد كونژوگه شده، اسپرميدين، ترهالوز و مالتوز به ترتيب 19، 20، 16 و 19 برابر مشاهده شد و بتائين بدون افزايش سايز ER با افزايش جزئي بيان EPO توليد اريتروپويتين را افزايش داد.

اختراع حاضر مربوط به توليد كيت الايزا تشخيص سرولوژي بيماران مبتلا به بروسلوز (تب مالت) مي باشد. در اين كيت براي اولين بار يك تركيب آنتي ژني حاوي whole cell Brucella abortus S99 lysates به عنوان ماده ليز شده كل پيكره باكتري بروسلا و به منظور تشخيص آنتي بادي كلاس IgM ضد باكتري بروسلا در سرم انسان استفاده گرديده است. تشخيص سريع و دقيق بيماري بروسلوز در فاز هاي اوليه توسط اختراع فوق سبب كاهش زمان و هزينه هاي درماني مي شود. معرف هاي كيت شامل آنتي ژن whole cell Brucella abortus S99 lysates كوت شده در پليت 96 خانه اي الايزا، محلول كونژوگه (آنتي بادي بزي ثانويه كونژوگه با HRP بر عليه IgM انسان)، محلول رقيق كننده و شوينده، محلول سوبسترا و محلول نگه دارنده واكنش مي باشد. غلظت مطلوب شده آنتي ژن براي كوت كردن در پليت معادل 7 ug/mLمحاسبه گرديده است. آنتي ژن به كار گرفته شده به واسطه واكنش متقاطع بين سويه ها قابليت تشخيص تمام سويه هاي صاف بروسلا را دارد. همچنين به واسطه استاندارد سازي هاي صورت پذيرفته در مواد و محلول هاي كيت فوق، اختراع حاضر ميزان حساسيت و اختصاصيت نتايج را نسبت به ساير كيت هاي مشابه افزايش داده است.

فاكتور رشد سلولهاي اندوتليال عروق نقش مهمي در رشد و تهاجم سلولهاي توموري ايفا مي كند.آنتي بادي هاي تك دوميني با منشا شتري (با نام تجاري نانوبادي) داراي اختصاصيت و افينيتي بالايي به تارگت خود مي باشند. اندازه كوچك نانوبادي ها دسترسي آنها را به مناطقي از تومور كه معمولا در دسترس ساير آنتي بادي ها قرار نميگيرد، امكان پذير ساخته است. يكي از مشكلات نانوبادي ها براي اهداف درماني، نيمه عمر پايين آنها مي باشد. راهكارهاي مختلفي براي افزايش نيمه عمر نانوبادي ها ارايه شده است كه يكي از آنها ساخت ديابادي مي باشد. ديابادي توليد شده در اين اختراع ماحصل اتصال دو نانوبادي مشابه با لينكر ناحيه لولاي آنتي بادي مي باشد. نتايج نشان داد كه ديابادي اثر مهاري بالاتري نسبت به نانوبادي بر روي تكثير، تشكيل تيوب و مهاجرت سلولهاي اندوتليال انسان دارد. علاوه بر اين نيمه عمر ديابادي در مدل موشي بالاتر از نانوبادي مي باشد. روش ارايه شده ابزار اميدواركننده اي در درمان بيماريهاي وابسته به فاكتور رشد مي باشد.

پلاسميد pMB-IRES جهت انتخاب سريعتر و دقيق تر كلونهاي سلولي مداوم توليد كننده پروتئين نو تركيب در سيستم بياني سلولهاي حشره

كيت استخراج اسيدنوكلييك DNA باكتريايي ازموادغذايي

ويبريوكلرا عامل و يا يك بيماري اسهالي مرگبار است اين بيماري از طريق اب و غذاي آلوده منتقل مي شود و يك مشكل جهاني به حساب مي آيد. ارسال نمونه هاي مدفوع مشكوك و يا از طريق كارت DBC يك روش سريع و بي خطر مي باشد و تنها لازم است كه نمونه مدفوع بيمار در قسمت مربوطه كارت به طور همگن ريخته شود و پس از خشك شدن در پاكت مربوطه قرار داده و از طريق پست به آزمايشگاه مرجع فرستاده شود. اين كارت مي تواند بعنوان منبعي از DNA براي آزمايشات تشخيصي ملكولي ويبريو استفاده شود. باكتري ويبريوكلرا جزء باكتريهاي بيماريزا بوده و كاركردن بر روي اين باكتري با خطراتي شخصي و محيطي همراه است اين كارت يك روش ايمن براي افرادي مي باشد كه در زمينه باكتري ويبريو فعاليت دارند و كارت DBC قابليت انجام آزمايش PCR مستقيما از نمونه بيمار را دارا مي باشد. در تخليص DNA ويبريو از كارت DBC درصد بسياري از مهار كننده هاي مدفوع در آزمايشات مولكولي مانند PCR از محيط خارج شده و لذا در كوتاهترين زمان پس از فرستادن به آزمايشگاه مرجع فرد مشكوك از وضعيت خود مطلع و با درمان به موقع مانع از پيشرفت بيماري و در ضمن با پي بردن به منبع آلودگي از شيوع بيماري و از اپيدمي شدن در مناطق ديگر جلوگيري مي شود. اين روش ارسال نمونه هاي مدفوع مشكوك و با از طريق كارت قابليت استفاده در آزمايشگاه ها مراكز تشخيصي و تحقيقاتي دارا مي باشد و انتقال آسان و بي خطر نمونه هاي كارت DBC امكان جابجايي نمونه را از مناطق دور به آزمايشگاه مرجع براي انجام آزمايش هاي مولكولي را امكام پذير كرده است. در ضمن نگهداري نمونه هاي مدفوع و با تحت شرايط دماي محيط براي مدت طولاني اين امكان را ايجاد مي كند كه در ذخاير ژنتيكي و ذخاير زيستي كاربرد داشته باشد.

توليد انگل تراريخته ژنتيكي ليشمانيا اينفانتوم بيان كننده ژن پروتئين فلورسنت سبز