فرایند تولید رده های موش ناك اوت در ژن فاكتور 8 به عنوان مدل بیماری هموفیلی A با استفاده از سامانه CRISPR/Cas9

خلاصه اختراع :

ما با استفاده از تكنولوژی CRISPR (CRISPR / Cas9) موفق به تولید دو نوع موش (كریسمس) متفاوت با كمبود فاكتور VIII انعقادی (FVIII) در موش NMRI موش شدیم. كار ما در سه مرحله مجزا انجام شد: (1) طراحی و ساخت سازه های ژنی، هدف قرار دادن یك منطقه در Exon 3 از جنس FVIII موش، (2) تزریق ساخت ژن به زژیوت موش NMRI و انتقال آن در رحم، و (3) تجزیه و تحلیل موش متولد شده است. موش های بنیانگذار توسط توالی DNA ژنومی در محل هدف ژن FVIII مورد بررسی قرار گرفت كه اختلالات فریم های خواندن ژن FVIII را در دو مورد مختلف نشان داد. جفتگیری موشهای بنیانگذار با نوع وحشی منجر به كسب موشهای جهش یافته بود. تجزیه و تحلیل DNA ژنوم نشان داد كه حذف ژن 22 جفت بازی در ژن فاكتور VIII در ردۀ موشی اول و یك درج 23 جفت بازی در ژن فاكتور VIII در ردۀ دیگر اتفاق افتاده است. تجزیه و تحلیل توالی cDNA از موش ردۀ اول تحمل حذف 22 جفت بازی تایید نمود. علاوه بر این، آزمایش انعقاد روی سرم موش با استفاده از یك كیت انعقادی نشان داد كه مقدار FVIII فعال در موش های جهش یافته به طور قابل توجهی پایین تر از میزان سالم بود كه تأثیر جهش در ژن FVIII موش و نسل های موش های هموفیلی. در حال حاضر در پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیك و زیست فناوری، در مركز موش های ترانس ژنیك، امكان تولید نسل های متوالی از هر دو ردۀ موش های هموفیلی فراهم شده است و پایداری نقص هموفیلی A در فرزندان نسل ها به طور پیوسته از نظر ویژگی های ژنوتیپ و فنوتیپ به اثبات رسیده است. CRISPR/Cas9