اختراع حاضر پلاسميد يوكاريوتي نوتركيبي است كه توالي كدكننده RpfE ترشحي از باكتري مايكوباكتريوم را به عنوان ادجوانت به آنتي ژن هاي كلون شده در آن اضافه مي نمايد. اين پلاسميد نوتركيب نياز به اضافه كردن ادجوانت (تركيبات شيميايي يا بيولوژيك براي تشديد پاسخ ايمني) بصورت جداگانه به آنتي ژن مورد نظر را در واكسن هاي DNA تزريقي مرتفع ميسازد. به علاوه اضافه كردن توالي كد كننده ي آنتي ژن موردنظر در پلاسميد مورد ادعا نياز به تزريق آنتي ژن پپتيدي را نيز مرتقع مي سازد. لذا زماني كه توالي كد كننده آنتي ژن مورد نظر به پلاسميد يوكاريوتي نوتركيب مورد ادعا وارد گردد، به همراه آن توليد مي شود و مي تواند براي آن به عنوان ادجوانت (براي القاء التهاب) عمل نمايد. پلاسميد نوتركيب حاوي اين توالي پس از تزريق به موش آزمايشگاهي با جذب سلول هاي سيستم ايمني مانند سلولهاي عرضه كننده آنتي ژن و لنفوسيت ها موجب شروع التهاب و افزايش پاسخ ايمني مي شود. بدين ترتيب نياز به استفاده جداگانه از ادجوانتها و همچنين پپتيد آنتي ژني موردنظر را مرتفع ساخته و موجب كاهش هزينه ها و ساده تر شدن فرآيند مي گردد. بوسيله ي اين سامانه ژني مي توان استفاده از واكسن هاي DNA را در روشي بسيار ساده تر و با هزينه كمتر به كار برد.

اختراع حاضر به معرفي روش جديدي جهت القاء مدل موشي انسفالوميليت خودايمن تجربي (EAE) با تزريق يك پلاسميد يوكاريوتي نوتركيب مي پردازد. در اين روش، پس از تزريق پلاسميد يوكاريوتي، نوروآنتي ژن مورد نياز جهت القاء در بدن موش توليد مي شود. لذا با اين روش نيازي به خريد و آماده سازي آن نوروآنتي ژن پروتئيني گران قيمت براي تزريق به موش نمي باشد. انسفالوميليت خودايمن تجربي رايج ترين و مناسب ترين مدل حيواني بيماري مالتيپل اسكلروزيس (Multiple Sclerosis(MS) انساني است كه امكان مطالعه مكانيسم آسيب زايي(Pathogenesis) بيماري و بررسي اثر روش هاي درماني جديد را فراهم مي آورد. در اين روش جديد، پس از تزريق زيرجلدي پلاسميد نوتركيب به موش آزمايشگاهي در كشاله ران، با فعال سازي سلول هاي عرضه كننده آنتي ژن و لنفوسيت ها، باعث ايجاد پاسخ ايمني عليه پپتيد غلاف ميلين شده و با تخريب غلاف ميلين اطراف آكسون ها موجب ايجاد علائم فلجي در موش مي شود. از اين طريق پس از حدود 2 الي 3 هفته باعث القاء EAE در موش مي گردد. درحال حاضر از روش هاي القاء فعال، القاء غيرفعال و ايجاد مدل هاي موشي ترانس ژن جهت ايجاد مدل موشي EAE استفاده مي شود ولي تمام اين روشها پيچيده، زمان بر، پرهزينه و نيازمند واردات مواد آنتي ژني هستند.

اين اختراع شامل توليد دو پلاسميد نوتركيب CRISPR/Cas9 مختلف حاوي دو gRNA اختصاصي براي حذف قطعه متناظر حاوي جهش IVS-II-1 (G>A ) در ژن HBB انساني در فرد مبتلا به اين نوع بتاتالاسمي است. اختراع حاضر شامل توليد يك پلاسميد يوكاريوتي نوتركيب CRISPR/Cas9 با نام اختصاري pX458 و يك پلاسميد يوكاريوتي نوتركيب CRISPR/Cas9 با نام اختصاري pX459 است كه هر كدام حاوي يك gRNA متفاوت طراحي شده و وارد شده به درون كاست بياني gRNA است. هدف از توليد اين دو پلاسميد اين بود كه يك قطعه از اينترون دوم ژن HBB را حذف كرده تا پيرايش طبيعي بهmRNA رونوشت اين ژن برگردد. پس از آماده سازي هر دو پلاسميد براي بررسي اتصال صحيح gRNA ها درون ژن HBB و همچنين بيان صحيح پروتئين Cas9 و عملكرد صحيح كمپلكس CRISPR/Cas9 پلاسميد ها به رده سلولي ترنسفكت مي شوند و در نهايت حذف قطعه تاييد مي گردد. با اين روش و به كمك اين تكنولوژي پيشرفته، اصلاح جهش IVS-ΙΙ-1 (G>A ) و در نتيجه اصلاح ژن بتا گلوبين، با هدف درمان ژني بتاتالاسمي انساني انجام مي گيرد. A kit for genetic correction of mutated HBB gene (IVS-II-1 (G>A)) for treatment of related beta thalassemia disease by two دثص recombinant CRISPR/Cas9 containing plasmids