اين اختراع شامل توليد دو پلاسميد نوتركيب CRISPR/Cas9 مختلف حاوي دو gRNA اختصاصي براي حذف قطعه متناظر حاوي جهش IVS-II-1 (G>A ) در ژن HBB انساني در فرد مبتلا به اين نوع بتاتالاسمي است. اختراع حاضر شامل توليد يك پلاسميد يوكاريوتي نوتركيب CRISPR/Cas9 با نام اختصاري pX458 و يك پلاسميد يوكاريوتي نوتركيب CRISPR/Cas9 با نام اختصاري pX459 است كه هر كدام حاوي يك gRNA متفاوت طراحي شده و وارد شده به درون كاست بياني gRNA است. هدف از توليد اين دو پلاسميد اين بود كه يك قطعه از اينترون دوم ژن HBB را حذف كرده تا پيرايش طبيعي بهmRNA رونوشت اين ژن برگردد. پس از آماده سازي هر دو پلاسميد براي بررسي اتصال صحيح gRNA ها درون ژن HBB و همچنين بيان صحيح پروتئين Cas9 و عملكرد صحيح كمپلكس CRISPR/Cas9 پلاسميد ها به رده سلولي ترنسفكت مي شوند و در نهايت حذف قطعه تاييد مي گردد. با اين روش و به كمك اين تكنولوژي پيشرفته، اصلاح جهش IVS-ΙΙ-1 (G>A ) و در نتيجه اصلاح ژن بتا گلوبين، با هدف درمان ژني بتاتالاسمي انساني انجام مي گيرد. A kit for genetic correction of mutated HBB gene (IVS-II-1 (G>A)) for treatment of related beta thalassemia disease by two دثص recombinant CRISPR/Cas9 containing plasmids

توليد پيت صنعتي به عنوان خاك پوششي قارچ تكمه اي مربوط به حوزه محيط زيست و كشاورزي مي باشد و به توليد صنعتي خاك پوششي قارچ تكمه اي تعلق دارد. خاك پوششي يكي از نهاده هاي مهم در توليد قارچ تكمه اي است كه معمولاً از منابع آلي تجديدناپذير (پيت) استخراج مي شود. در ايران منابع طبيعي پيت محدود بوده و هزينه فراوان براي تهيه آن صرف مي گردد و پيامدهاي زيست محيطي فراواني بر اثر برداشت پيت ايجاد مي گردد. از سوي ديگر پسماندهاي كشاورزي SMC و پالم پيت معضلات زيادي ايجاد نموده است. براي رفع اين مشكلات، با استفاده از فرايندهايي پيت صنعتي توليد گرديده است كه مقدار اجزاي تشكيل دهنده آن عبارتند از (ورمي¬كمپوست SMC 6 قسمت حجمي، پالم پيت 3 قسمت حجمي، پودر سنگ گچ 1 قسمت حجمي، بنتونيت 5/0 قسمت حجمي) و داراي ويژگي¬هاي قابليت جذب رطويت بالا (رطوبت اشباع وزني 128.6%)، رسانايي الكتريكي پايين (0.7 dSm-1)، تخلخل بالا (75.9%) و تخلخل هوايي كل (15.6%)، رطوبت مزرعه نسبي(0.78) و ظرفيت نگهداشت آب (63.4%) مناسب مي باشد و 54% ذرات آن كوچكتر از mm 2 است. اين محصول قابليت جايگزيني كامل پيت را داشته و باعث كاهش و قطع وابستگي صنعت پرورش قارچ تكمه اي به پيت طبيعي خواهد شد.

ترميم زخم فرآيندي فيزيولوژيك بوده كه پس از بروز آسيب در پوست شروع مي¬شود. استفاده از تركيبات زيستي (عصاره¬هاي جانوري و گياهي) به عوض كاربرد داروهاي شيميايي در ترميم زخم از اهميت زيادي برخوردار است. در اين اختراع با بررسي و سنجش اثرات مختلف عصاره بدن لارو سوسك(Fabricius, 1776) morio Zophobas يا سوپر ورم (Superworm) مشخص گرديد كه تركيبات اين عصاره مي¬تواند به عنوان يك ترميم¬كننده جديد و كارآمد (Wound healer) در بهبودي زخم¬هاي پوستي مورد استفاده موثر و آسان قرار گيرند. در تفسير مكانيسم عمل توان ترميم¬كنندگي اين عصاره˓ در اختراع حاضر مشخص گرديد كه كاربرد عصاره سوپر ورم با دو غلظت¬ 50 و 200 ميكروگرم/ ميلي¬ليتر از حلال (براي 12روز) موجب افزايش بيان ژن فاكتور¬هاي رشد IGF و TGFβ همراه با بازآرايي¬هاي بهتر و كامل¬تر بافتي˓ افزايش سنتز كلاژن در موضع زخم و تسريع در انقباض و بسته¬شدن زخم (Wound closure) در پوست موش¬هاي مورد آزمايش (در مقايسه با اثر پماد فني¬تويين 1 درصد) ¬شده است. با توجه به موارد بالا˓ مي¬توان اين عصاره را به عنوان يك كانديد موثر در ترميم زخم¬هاي پوستي در حيوانات و انسان در نظر گرفت.

در پي اهميت آنزيم ليپاز طي اين تحقيق ابتدا توالي ژنومي آنزيم ليپاز از باكتري سرمادوست Psychobacter sp.C18 گرفته شد؛ و پس از وارد شدن توالي ژني در پلاسميد بياني pET28a، وارد باكتري DH5α مستعد دريافت پلاسميد شد و پرايمرهايي جهت شناسايي ژن مربوطه موجود در پلاسميد طراحي گرديد؛ و از تكنيك كلوني PCR جهت اطمينان از وجود قطعه ژن مورد هدف استفاده گرديد. سپس پلاسميد pET-28a را كه حاوي ژن بيان آنزيم ليپاز بود را براي برسي بيان پروين وارد باكتري مستعد بياني BL21 گرديد و پس ازالقاي بيان پروتئين ، پروتئين بيان شد و به كمك ستون كروماتوگرافي تمايلي نيكل سفارز، آنزيم ليپاز توسط شيب غلظتي ايميدازول استخراج گرديدو جهت سنجش وزن آنزيم از تكنيك SDS-PAGE استفاده شد؛ و وزن تقريبي آن حدود 35 كيلودالتون تقريب زده شد. پس از انجام تست رنگ سنجي برادفورد و تعيين غلظت پروتئين كل، دماي بهينه آنزيم 30 درجه سانتي گراد براورد شد و پايداري دمايي آن از دماي 4تا60درجه سانتي گراد به مدت 60 دقيقه سنجيده شد و همچنين pH بهينه و پايداري pH آن در pHهاي 7 ,8 و9 به مدت 140 دقيقه مورد بررسي قرار گرفت و سپس آنزيم بر روي بستر نانوهيبريدي كلسيم و آگارز اصلاح شده با ذرات آمين به صورت فيزيكي تثبيت شد؛ همچنين پس از يافتن غلظت مناسب گلوتارآلدئيد توسط گلوتارآلدئيد به صورت كولانسي تثبيت شد؛ و جهت اطمينان توسط الكتروسكوپ الكتروني تصوير برداري شد. همچنين طي اين آزمون دما بهينه وپايداري دمايي آنزيم تثبيت شده ارزيابي شد كه پس از تثبيت آنزيم فعاليتي نسبي بيشتري را در دماهاي بالا از خود نشان داد همچنين سبب افزايش پايداري دمايي گرديد و pH بهينه و پايداري آن هم سنجيده شد. همچنين پارامترهاي سينتيكي، ترموديناميكي و رفتار آنزيم در حضور نمك هاي فلزي، حلال هاي طبيعي، دترجنت ها و مهاركننده ها در هر دو حالت آزاد و تثبيت شده مورد بررسي قرار گرفت؛ كه طي آن نمك هاي: كلسيم كلريد، منيزيم كلريد، پتاسيم كلريد وسديم كلريد فعال كننده بودند همچنين آنزيم درحضور حلال هاي طبيعي نظير متانول ,اتانول و پروپانول قادر به فعاليت در حالت آزاد و پس از تثبيت بود. نتايج نشان داد آنزيم پس از تثبيت مقاومت بيشتري در برابر دترجنت ها بدست آورد. آنزيم پس از تثبيت كولانسي قادر است تا 50 درصد فعاليت خود را تا 8 بار استفاده مجدد از آنزيم حفظ كند.