اختراع حاضر، در مورد ايجاد يك پروتئين استرپتوكيناز كايمر با فعاليت اختصاصي افزايش يافته عليه فيبرين در مقايسه با استرپتوكيناز استاندارد (SKC2) حاصل از سوش استاندارد ATCC 9542 متعلق به استرپتوكوك هاي گروهC (GCS) مي باشد كه به عنوان دارو در درمان اختلالات پاتولوژيك ناشي از ايجاد لخته خون به كار مي رود. ايجاد اين پروتئين استرپتوكيناز كايمر از طريق جابجايي و انتقال دومين بتا ژن استرپتوكيناز سويه والدي ALAB49 متعلق به استرپتوكوك هاي گروه A (GAS)با فعاليت فيبرينوليتيك كم ولي اختصاصيت بالا عليه فيبرين به جاي دومين بتا ژن استرپتوكيناز سويه والدي G88 متعلق به استرپتوكوك هاي گروهG (GGS) با فعاليت فيبرينوليتيك بالا ولي اختصاصيت كم عليه فيبرين انجام شده است. فعاليت اختصاصي مولكول كايمر بدست آمده از اختراع حاضر، در حضور فيبرين نزديك به سه (2.7) برابر در مقايسه با مولكول استاندارد افزايش نشان داده است، ازين رو اين مولكول مي تواند به عنوان جايگزيني از استرپتوكيناز استاندارد در توليد داروي نوتركيب جهت درمان اختلالات ناشي از ترومبوز از جمله سكته قبلي، آمبولي ريوي، ترومبوز عميق عروق خوني بكار برده شود

هدف اختراع حاضر، ايجاد مولكولهاي موتانت استرپتوكيناز از طريق ايجاد موتاسيون در ژنskc) S.equisimilis group C, SKC9542 (ژن استخراج شده و استاندارد جهت توليد استرپتوكيناز نوتركيب دارويي) به منظور افزايش فعاليت با استفاده از تكنيكهاي مهندسي ژنتيك و بيوتكنولوژي مي باشد. مولكولهاي موتانت بدست آمده از اختراع حاضر مي تواند به عنوان جايگزيني از skc در توليد داروي نوتركيب جهت درمان اختلالات ناشي از ترومبوز از جمله سكته قبلي، آمبولي ريوي، ترومبوز عميق عروق خوني بكار برده شود

تفاوت پروفايل ژنتيكي سويه‌هاي در گردش در جامعه با سويه‌هاي واكسن سياه‌سرفه از يك سو و تلاش براي تهيه واكسنهاي كارامد بر اساس واكسنهاي زنده ضعيف شده از سوي ديگر، ما را بر آن داشت تا در اين تحقيق، بر اساس نتايج تحقيقات اپيدميولوژي در ايران، از سويه‌هاي بوردتلا پرتوسيس بومي كشور با پروفايل غالب ژنتيكي در تهيه سويه زنده ضعيف شده بر اساس ايجاد جهش در ژن ptxS1 استفاده شود. لذا ابتدا بر اساس پروفايل غالب ژنومي و ويرولانس سويه‌هاي بوردتلا پرتوسيس در گردش در جامعه، يك سويه بومي جدا شده از نمونه هاي باليني انتخاب شده و پس از موتاسيونهاي مربوطه در ژن ptxS1 و غيرفعال سازي آن، سازه‌اي مشابه با توالي ژن ptxS1 و قطعات فرادست و فرودست آن در وكتور مناسب ساخته شد. سپس بر اساس واكنشهاي كانجوگاسيون و نوتركيبي همولوگ ، ژن ptxS1 موتانت جايگزين ژن اصلي در سويه انتخابي شد. پس از ساخت سويه موتانت ضعيف شده، بيان ژن موتانت و كاهش توكسيسيته توكسين PTX بررسي و در نهايت ايمني زايي سويه موتانت در مدلهاي موشي مورد مطالعه قرار گرفت. با استفاده از نتايج اين مطالعه كه در واقع ساخت سويه موتانت در ژن ptxS1 بر اساس سويه بومي ايران با پروفايل ژنومي و ويرولانس غالب بود، همزمان با مطالعات انجام شده در كشورهاي توسعه يافته، گامي اوليه و مهمي در جهت تهيه واكسنهاي زنده ضعيف شده سياه‌سرفه، برداشته شد.

ابتدا باكتري S.equisimilisگروه G شناسايي شده است كه تا كنون گزارشي مبني بر حضور يا استخراج آنزيم HAS اعلام نشده است. براساس سكانس DNA كدكننده آنزيم HAS از باكتريG88 S. equisimilis و با ستفاده از نرم افزارهاي پيش‌بيني كننده موقعيت پروتئين در سلول نظير TMHMM Server v. 2.0 موقعيت پروتئين has در سلول شبيه ‌سازي ‌شده و موقعيت آمينواسيدهاي ابتدا و انتها دمينها از جمله دمين درون‌سلولي جهت طراحي آغازگرها به دست آمد و با نرم‌افزار GeneRunner V6.1 آغاز‌گر‌ها شناسايي شدند. سپس فرمهاي كوتاه شده و كامل آنزيم به وسيله PCR تكثير، كلون و توالي¬يابي شد. پس از آن به باكتري E.coli انتقال يافته و بيان آنزيم ها انجام شد. پس از تخليص و تاييد از غشا سلولي، كارايي آنزيمها به¬صورت جداگانه و همچنين آنزيم كامل براي توليد HA مورد بررسي قرار گرفته و نشان داده شده است كه كليه فرمهاي كوتاه شده داراي فعاليت آنزيمي مي باشند هر چند نسبت به فرم كوتاه كاهش فعاليت وجود دارد. همچنين مشخص شد كه دمين درون سلولي اين آنزيم بخش فعال آن در توليد HA بوده بدون نياز به سلول و در شرايط In vitro و بدون وابسته بدون به غشا سلولي مي¬تواند در حضور سوبستراي اوليه و ايجاد شرايط بافري مناسب HA فرايندهاي اتصال به مونوساكاريدي و پليمريزاسيون آنها را انجام دهد اين اولين گزارش در مورد توليد In vitro با استفاده از كوتاه ترين فرم آنزيم هاي پليمريزه كننده HA جهت بيوسنتز اين بيوپليمر ارزشمند مي باشد. همچنين ساير فرمهاي كوتاه شده با حذف دمين هاي غشايي داراي فعاليت مي باشند كه فعاليت فرمهاي HAS23, HAS2, HAS3 اين امكان را براي توليد فرمهاي تثبيت شده اين اشكال در سطح ليپوزوم و اتصال يك طرفه و يا دوگانه دمين هاي غشايي و بررسي كارايي سيستم هاي قابل بازيابي جهت توليد يكنواخت و طولاني مدت و به صرفه اقتصادي را فراهم خواهد آورد.