محلول استخراج اسیدهای نوكلئیك از گیاهان آبزی دارای تركیبات ثانویه بالا

خلاصه اختراع :

استخراج اسیدهای نوكلئیك خالص و كافی از گیاهان آبزی به علت دارا بودن رنج وسیعی از متابولیت های ثانویه، نحوه اشتباه نمونه برداری، خصوصیات مرفولوژیكی آنها، مسافت طولانی محل نمونه برداری و آزمایشگاه و... معمولاً مشكل و چالش برانگیز است. از آنجا كه كشورمان ایران یكی از منابع غنی از گونه های بارزش و متنوع آبزی است كه در صنایع مختلف از جمله پزشكی، آرایشی و بهداشتی، داروسازی، غذایی و صنعت دارای كاربرد هستند، توجه دانشمندان و محققین بسیاری را به خود جلب كرده است. بنابراین استخراج DNA خالص جهت مطالعات مولكولی، شناسایی گونه ها، حفظ وارزیابی گونه ها، جلوگیری از خطر انقراض گونه ها، بررسی پراكنش و توزیع آنها و... از اهمیت ویژه ای برخوردار است. محققین جهت استخراج اسیدهای نوكلئیك از گیاهان آبزی باید محلول های مورد نیاز را خود بسازند یا از كیت های غیراختصاصی موجود كه بسیار گران قیمت هستند استفاده كنند كه در نهایت منجر به استخراجی ناموفق و نامطلوب خواهد شد. بنابراین مشكلات و نیازهای موجود مارا براین واداشت كه محلولی را تولید كنیم كه نه تنها استخراج آسان و ارزان DNA ژنومی با كیفیت و كمیت بالا از نمونه های گیاهان آبزی را فراهم سازد بلكه می توان آن را برای كلیه گیاهان تازه یا خشك شده ای كه دارای متابولیت های ثانویه بالایی هستند را در شرایط درون و بیرون آزمایشگاهی نیز به كاربرد. در محلول ساخته شده غلظت و PH مواد EDTA ، بتا-مركاپتو اتانول، كلرید سدیم، تریس-بیس به خوبی تنظیم و دو ماده موثر PVP و سارگوسیل به بافر استخراجی افزوده شد. با تنظیم مواد موجود در بافر استفاده از ماده پر خطر و پرهزینه نیتروژن مایع جهت خرد كردن نمونه ها را حذف نمودیم و همچنین استفاده از ماده خطرناك فنول جهت استخراج مطلوب تر ضرورتی ندارد. ارزیابی كمی و كیفی اسیدهای نوكلئیك استخراجی توسط بافر تولیدی و مقایسه آن با روش های متدوال دیگر، خلوص و میزان بالای DNA استخراج شده توسط بافر تولیدی را نسبت به دو روش دیگر به خوبی نشان دادند، به طوریكه نتایج نشان دهنده عاری بودن اسیدهای نوكلئیك استخراجی از تركیبات پروتیینی و پلی فنولی/ پلی ساكاریدی می باشد. به طوركلی بافر تولیدی قابلیت كاربرد برای كلیه دانشگاه ها، آزمایشگاه ها و مراكز تحقیقاتی گیاهی را دارد كه كاربر با خرید یك محلول 100 میلی لیتری، قادر به جداسازی سریع، ایمن، ارزان DNA با كیفیت و كمیت مطلوب از چندین نمونه های گیاهان آبزی و یا حتی غیرآبزی كه دارای تركیبات ثانویه بالا هستند جهت اهداف خود می باشد. قابل ذكر است از آنجا كه این بافر قادر به جداسازی حتی میزان بسیار كم DNA موجود در بافت های خشك شده می باشد، بنابراین از آن می توان برای مظالعات نمونه های هرباریومی چندین سال قبل نیز استفاده كرد.