ساخت كتابخانه آنتی‌بادی غیرایمن Fab انسانی با استفاده از روش نمایش فاژی و جداسازی آنتی‌بادی اختصاصی آنتی ژن c-Met

خلاصه اختراع :

اختلال در مسیر پیام‌رسانی فاكتور رشد هپاتوسیت/ فاكتور تبدیل مزانشیمی-اپیتلیالی (HGF/c-Met در انواع بدخیمی‌ها و ارتباط آن با تهاجم تومور و پیش آگهی ضعیف، c-Met را به عنوان یك هدف درمانی مهم مطرح نموده است. اگرچه مطالعات متعدد منجر به تولید چندین آنتی بادی مونوكلونال و مهاركننده‌های مولكول كوچك علیه c-Met شده است، اما تا بحال، هیچ یك از این مولكول‌های درمانی برای استفاده در بالین مورد تأیید قرار نگرفته‌اند. در مطالعه حاضر با هدف جداسازی آنتی‌بادی‌های كاملاً انسانی علیه آنتی ژن c-Met، یك كتابخانه غیرایمن بزرگ از قطعه متصل شونده به آنتی‌ژن (Fab) با اندازه عملكردی 1010× 5/5 كلون، با استفاده از روش نمایش فاژی تولید شد. كتابخانه به دست آمده با هدف جداسازی قطعات Fab اختصاصی آنتی ژن c-Met، متحمل پنج دور پیاپی پنینگ در برابر دومین خارج سلولی آنتی ژن نوتركیب c-Met، شد. پس از غربالگری كلون‌ها با استفاده از روش الایزای منوكلونال، چهار كلون با بیشترین تفاوت OD450 نسبت به گروه‌های كنترل، انتخاب و پس از تایید بیان قطعات Fab با استفاده ازwestern blot ، تعیین توالی شدند. توانایی آنتی‌بادی‌های انتخاب شده برای اتصال به آنتی‌ژن‌های native در سطح سلول‌های MKN45 بیان كننده آنتی‌ژنc-Met (یك رده سلولی متاستازی آدنوكارسینوم معده انسان) با استفاده از فلوسیتومتری مورد ارزیابی قرار گرفت. از بین 4 كلون تأیید شده از نظر بیان قطعه Fab و قابلیت اتصال به آنتی‌ژنc-Met در الایزای منوكلونال، كلون C16، با افینیتی 109 M-1 ×0.3 ، بالاترین (63%) میزان اتصال به سلول‌های MKN45 را نسبت به رده سلولی كنترل منفی T47D (رده سلولی سرطان سینه با عدم بیان c-Met) (9.03%) نشان داد. در نهایت مطالعه ما یك كتابخانه آنتی بادی غیرایمن، به عنوان یك منبع با‌ارزش برای یافتن آنتی‌بادی‌های اختصاصی جدید Fab علیه طیف وسیعی از آنتی‌ژن‌ها فراهم نموده، همچنین، با معرفی یك آنتی بادی Fab كاملاً انسانی با افینیتی بالا و اختصاصی آنتی‌ژن c-Met، (C16)، كه دارای پتانسیل تبدیل به آنتی‌بادی درمانی، یا استفاده به عنوان عامل انتقال مواد شیمی درمانی می‌باشد، راهبردی برای از بین بردن سلول های توموری c-Met مثبت ارائه می‌دهد.