زمينه فني اختراع اين اختراع مربوط مي شود به خالص سازي با روش هاي منحصر به فرد پروتئين مورد نظر و فرمولاسيون و در نهايت، بررسي خصوصيات فارماكوكينتيكي مولكول جديد دارويي mt-PA در حيوان آزمايشگاهي Rat شرح مختصر در حال حاضر بيماري هاي قلبي – عروقي كه به وسيله اختلالات قلبي و عروق خوني ايجاد مي‌شود، ساليانه 3/17 ميليون مرگ و مير را به خود اختصاص ‌داده اند و آمارها بيانگر رشد بيشتر از 6/23 ميليون در سال 2030 مي‌باشند. تا به حال 3 داروي ترومبوليتيك مورد تاييد FDA قرار گرفته است كه هر كدام مشكلاتي مربوط به نيمه عمر كوتاه و ميل اتصالي پايين به ترومبين و تخليه فيبرينوژن گردش خون و ... دارد. با توجه به خصوصيات مطلوب مولكول جديد دارويي mt-PA از جمله، كاهش پاكسازي پلاسمايي، كاهش اندازه مولكول و افزايش نيمه عمر در جريان خون، افزايش اختصاصيت به فيبرين و مقاومت به مهار-كننده پلاسمينوژن بافتي (PAI-1)، در اين اختراع خالص سازي با استفاده از روش هاي افينيتي كروماتوگرافي با تركيب بافرهاي منحصر به فرد براي اين پروتئين و Size exclusion chromatography و نيز فرمولاسيون اين مولكول انجام شد و در نهايت، خصوصيات مطلوب فارماكوكينتيك آن در مقايسه با داروي مشابه موجود در بازار در حيوان آزمايشگاهي rat نشان داده شد.

نظر به نقش حياتي عوامل ترميوبيتيك در درمان بيماران با انفاكتوس حاد قلبي، توسعه انواع عوامل ترميوبيتيك بسيار مورد توجه بوده است. امروز داروهاي فعال كننده پلاسمينوژن جديد با ويژگيهاي بهينه فرماكوكينتيك و فارماكوديناميك مدنظرند. فرم هاي متفاوت كوتاه شده ()Truncated) شامل دويمنهاي K2S با هدف كاهش حذف كبدي و افزايش نيمه عمر دارو مورد بررسي قرار گرفته اند ليكن با حدف دومين finger كه نقش اتصال به فيبرين را دارد تمايل دارو به فيبرين كاهش و نتيجتاً عارضه هموراژي آن افزايش مي يابد. در اين مطالعه به جهت جبران اين نقص دارو يك قطعه 4 آمينو اسيدي (GHRP) با تمايل مناسب به فيبرين در بالادست دومينهاي K2S قرار گرفته كه منجر به بهسازي تمايل به فيبرين و كاهش عوارض جانبي دارو مي گردد. همچنين يك قطعه 4 آمينو اسيدي واقع در توالي KHRR 296-299 با چهار آمينو اسيد آلانين جايگزين گرديده كه اين عمل در افزايش مقاومت به مهاركننده دارو و افزايش نيمه عمر آن مؤثر است.

پروتئين فعال كننده پلاسمينوژن بافتي tPA يكي از انواع فعال كننده پلاسمينوژن مي باشد كه در رفع انسداد لخته اي كه از مهمترين علل بروز سكته قلبي و معزي است اهميت فراواني يافته است. اين پروتئين پيچيده داراي 527 امينو اسيد 17 باند دي سولفيد و چندين اليگو ساكاريد در سطح خود مي باشد كه همين مساله توليد آن را در ميزبان هاي پروكاروت مشكل كرده است. امروزه tPA نوتركيب با استفاده از سلولهاي تخمدان هامسترچيني CHO توليد مي شود. با اين حال، وجود مشكلاتي از قبيل گران بودن محيط كشت CHO و نيز ضرورت استفاده از سرم در محيط كشت كه احتمال بروز آلودگي را افزايش داده و خالص سازي پروتئين را مشكل مي كند، باعث شده است كه اخيرا مطالعه در جهت يافتن ميزبان هاي مناسب تر افزايش يابد. در سال خاي اخير انگل Leishmonia tarentolae از خانواده تريپاتوزوميده در توليد پروتئين هاي نوتركيب انساني اهميت زيادي يافته است كه از جمله علل آن مي توان به بيماريزا نبودن آم، سرعت بالاي رشد، امكان كشت در حجم بالا، محيط كشت ساده و عدم نياز به سرم و گليكوزيلاسيون مناسب پروتئين هاي حاصل و ... اشاره كرد. در پروژه حاضر تلاش بر آن بوده است تا tPA نوتركيب انساني با استفاده از Ltarentalae بيان گردد. بدين منظور دو كپي از ژن tPA در دو كانستراك بياني Ltarentalae كلون و پس از وارد كردن آنها به سلول انگل از طريق الكتروپوريشن، در ژنوم انگل اينتگره گرديدند. پس از جدا كردن كلون هاي ترانسفورم شده در محيط حاوي آنتي بيوتيك هاي مناسب بيان tPA نوتركيب در محيط كشت اين سلول ها بررسي شد. در نهايت با انجام تست Zymography بيان tPA نوتركيب در اين ميزبان به اثبات رسيد.